[发明专利]一种耳聋左慈丸指纹图谱的检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于中药成分分析检测技术领域，涉及一种耳聋左慈丸指纹图谱的检测方法及其应用，具体涉及一种耳聋左慈丸指纹图谱的检测方法及其在质量检测中应用。

背景技术

耳聋左慈丸出自清·凌奂的《饲鹤亭集方》，收载于2005、2010和2015年版《中国药典》(一部)，是中医治疗耳鸣、耳聋的经典名方，由六味地黄丸添加竹叶柴胡和磁石而成，功效为滋阴清热、益气平肝等，用于耳聋耳鸣、头晕目目眩及肝肾阴虚等症状，疗效显著。广泛的临床应用及其药物研究进展均证实，耳聋左慈丸对老年性、药物性及突发性耳聋、头晕目眩、视物恍惚及白内障证属肝肾阴亏、虚火上炎者等均有准确而显著的疗效。现代药理学研究证明，耳聋左慈丸可以通过调节耳蜗组织中cAMP含量及PKA的表达水平发挥其对老年性耳聋的治疗作用；可能通过上调耳蜗组织AQP4蛋白表达，达到治疗肾虚小鼠耳聋的作用；可明显改善老年肾虚耳聋患者耳聋等级以及血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平，对临床具有指导意义。

耳聋左慈丸质量标准研究的文献报道，多选择具有生物活性的单一指标成分进行定量控制。唐彩泉、宫淑枝等分别建立了耳聋左慈丸中丹皮酚的高效液相检测方法，常忆凌等利用高效液相和超临界流体萃取相结合的方法分析耳聋左慈丸中丹皮酚的含量；许丹、陆旋、王玉峰等分别建立了耳聋左慈丸中马钱苷的含量检测方法；朱山寅使用高效液相技术检测耳聋左慈丸中芍药苷的含量；唐立群等选用薄层扫描技术建立了耳聋左慈丸中熊果酸的检测方法；姚先梅利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法检测了耳聋左慈丸中熊果酸的含量；姜雪敏等选用HPLC法测定耳聋左慈丸中毛蕊花糖苷的含量。近年来，对中药复方制剂的质量控制，多以其指纹图谱进行定性和多成分定量研究，进而可以更真实的反映中药质量。陈英红等同时测定了耳聋左慈丸中丹皮酚和马钱苷的含量，徐建等建立了同时测定耳聋左慈丸中芍药苷、马钱苷和丹皮酚含量的质量控制方法。

但是，由于耳聋左慈丸由八味中药材组成，所含化学成分极其复杂，仅靠同时对几个化学成分进行含量测定，无法全面反映中药制剂的物质基础和化学成分群的整体性和复杂性，难以全面控制耳聋左慈丸的内在质量。指纹图谱是根据中药多组分、多靶点的整体综合作用的特点，从“全成分”的角度出发的一种现代中药质量控制方法，对非单一成分药物的质量控制更加全面。因此，有必要建立耳聋左慈丸的指纹图谱，能够完成对耳聋左慈丸中成分的定性分析，以便对耳聋左慈丸进行有效的质量控制。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种耳聋左慈丸指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化条件的前处理及高效液相色谱方法，首次建立了耳聋左慈丸的高效液相指纹图谱，从不同侧面突出反映不同类别化学成分对耳聋左慈丸指纹图谱系统的贡献，从而实现对耳聋左慈丸整体化学成分的检测，比较全面的反映耳聋左慈丸中成分的现状，能够较全面的对耳聋左慈丸的质量标准提供参考依据。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种耳聋左慈丸指纹图谱的检测方法，包括下列步骤：

1)供试品溶液的制备：称取耳聋左慈丸粉末，加入甲醇水溶液，超声提取后分层，取上清液过滤后获得续滤液，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：分别称取丹皮酚、马钱苷、莫诺苷、芍药苷、5-羟甲基糠醛对照品，加入甲醇水溶液溶解，配成对照品溶液；

3)测定：采用相同色谱条件的高效液相色谱(HPLC)法分别测定供试品溶液和对照品溶液，获得供试品溶液的指纹图谱和对照品溶液的指纹图谱，将供试品溶液的指纹图谱与对照品溶液的指纹图谱进行比较，对供试品溶液指纹图谱中的指标成分进行归属定位，从而获得耳聋左慈丸指纹图谱。

优选地，步骤1)中，所述耳聋左慈丸粉末加入的重量与所述甲醇水溶液加入的体积之比为2：20-30(g/ml)。更优选地，所述耳聋左慈丸粉末加入的重量与所述甲醇水溶液加入的体积之比为2：25(g/ml)。所述耳聋左慈丸粉末和甲醇水溶液称取时，应当精密称取。

优选地，步骤1)中，所述耳聋左慈丸粉末与甲醇水溶液在超声提取前，要称重，并在超声提取后冷却，再称重，用甲醇水溶液补足失重，摇匀。

优选地，步骤1)中，所述超声提取时间为30-60min。更优选的，所述超声提取时间为45min。所述超声提取在密闭容器中进行，所述密闭容器为具塞密闭的三角锥形瓶。

优选地，步骤1)中，所述分层选自静置分层或离心分层中的一种。

更优选地，所述静置分层的时间为5-15min。