[发明专利]一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料及其制备方法，制备方法包括：(1)将透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇反应，制得HA‑SH；(2)将罗丹明接枝于HA‑SH上，制得RhB‑HA‑SH；(3)将Fe₃O₄纳米粒、RhB‑HA‑SH和H₂O₂反应，制得超顺磁性荧光HA‑SH；(4)超顺磁性荧光HA‑SH、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、PEG‑FA和anti‑EpCAM抗体反应，制得。该磁性材料饱和磁化强度高，磁响应性和生物相容性好，能够实现与循环肿瘤细胞的特异性结合，并具有一定的普适性。

技术领域

本发明属于磁性材料技术领域，具体涉及一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料及其制备方法。

背景技术

近年来，恶性肿瘤已逐渐成为危害人类健康的重大疾病之一。其较高的发病率和居高不下的致死率引起了医生和科学工作者等在内的众多领域研究者们的关注。癌症相关细胞/因子的早期检测在癌症的诊疗和预后监测方面发挥着至关重要的作用。临床实践表明，原发组织的恶性肿瘤一般不会直接导致患者的死亡，而肿瘤转移大大降低了肿瘤患者的存活率，因此，肿瘤转移的早期诊断和检测对提高患者的存活率具有重要的现实意义。

循环肿瘤细胞(CTCs)，是一种游离在肿瘤转移患者血液循环系统的具有侵袭能力的肿瘤细胞，可以通过一种非侵袭的方式从患者血液中分离出来，用以监测患者的病程状况。因此，CTCs检测，也被称为“液态活检”，在癌症的早期诊断和诊疗预后方面发挥着越来越重要的作用。

目前，研究者们利用不同的功能化策略构建多功能的超顺磁性纳米材料体系，用以快速精确检测循环系统中存在的极少量的CTCs，以期为肿瘤早期诊断和治疗预后等临床研究提供具有指导意义的理论依据。其中，大多数方案均使用上皮细胞粘附因子抗体(anti-EpCAM抗体)作为靶向功能分子用以实现对CTCs的靶向识别和捕获。然而，临床研究表明，由于不同CTCs表面EpCAM的表达量具有明显差异，甚至有些具有侵袭能力的肿瘤细胞不表达，这导致这一类功能化策略受到明显的限制。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种用于循环肿瘤细胞高效检测的磁性材料及其制备方法，该磁性材料具有粒径分布窄，饱和磁化强度高，磁响应性和生物相容性好等优点，多靶向配体的应用使该磁性材料能够实现与循环肿瘤细胞(CTCs)的特异性结合，并对多种肿瘤细胞具有一定的普适性。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料，其制备方法包括以下步骤：

(1)将透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇混合，进行反应，制得HA-SH；

(2)将罗丹明接枝于HA-SH上，制得RhB-HA-SH；

(3)将Fe₃O₄纳米粒、RhB-HA-SH和H₂O₂反应，制得超顺磁性荧光HA-SH；

(4)将超顺磁性荧光HA-SH、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、PEG-FA和anti-EpCAM抗体反应，制备靶向功能超顺磁性荧光HA-SH。

进一步地，步骤(1)具体过程为：将透明质酸溶于PBS缓冲液中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑，搅拌反应2-3h，然后再加入胱胺盐酸盐搅拌过夜，最后加入二硫苏糖醇继续反应24-36h，制得HA-SH；其中，透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇的摩尔比为1-2:2-4:2-4:2-4:3-6。