[发明专利]一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法

权利要求书

1.一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：取牛脂肪组织，在液氮环境中研磨至粉末状，迅速转移至预冷的离心管中；

步骤2：向步骤1的离心管中加入trizol，使用振荡器振荡5～20分钟，然后裂解1小时，得裂解液，离心，去除上层脂肪层与底部不溶物，取中间红色透明裂解液；

步骤3：在步骤2所得中间红色透明裂解液中，缓慢加入氯仿，手动振荡混匀，于冰上静置5～20min，然后离心，取透明上清液；

步骤4：在步骤3所得透明上清液中，缓慢加入预冷的异丙醇，于冰上静置5～20min，然后离心，弃上清液，得底部沉淀；

步骤5：在步骤4所得底部沉淀中，加入体积分数为75%的乙醇溶液，轻微振荡，使底部沉淀悬浮，离心，弃上清液，得第一次底部沉淀，再次加入体积分数为75%的乙醇溶液，轻微振荡，使底部沉淀悬浮，离心，弃上清液，得第二次底部沉淀；

步骤6：取步骤5所得第二次底部沉淀，使用滤纸吸干离心管内的液体，干燥7～10min，然后加入DEPC处理水溶解。

2.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述研磨时间为7～13min。

3.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤2中所述裂解1小时过程中振荡离心管。

4.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤1所述的牛脂肪组织的质量和步骤2所述的trizol的体积比为0.1～0.3:1～1.5。

5.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤2～步骤5所述的离心的转速均为12000r/min ，离心的时间为10～15min，离心温度为4℃。

6.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤3所述中间红色透明裂解液与氯仿的体积比为3～4:1，冰上静置时上下颠倒使分层消失。

7.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，步骤4所述透明上清液与异丙醇的体积比为1:1～1.3。

8.根据权利要求1所述的一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，所述滤纸呈圆心角度为5～20°的扇形。