[发明专利]肝脏特异性转录调控序列及其应用

说明书

本发明涉及一种肝脏特异性转录调控序列。具体地，本发明提供了一种可以驱动增强下游基因在肝脏细胞中的特异性表达的调控序列，该调控序列包含白蛋白和转甲状腺素蛋白的调控序列，可以用于在肝脏细胞中特异性的表达治疗性基因，如凝血因子IX基因，对于经肝细胞表达的基因治疗策略都具有非常重要的意义。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，更具体地涉及一种肝脏特异性转录调控序列及其应用。

背景技术

血友病B(Hemophilia B,HB)属于单基因遗传性疾病，是染色体Xq27.1上的人凝血因子IX编码基因(hF9)缺陷所致的性染色体连锁遗传性出血性疾病，在全球男性中发病率约1/25000。正常的人F9基因全长约34kb，其中编码序列cDNA长度为1383bp，位于X染色体长臂末端Xq27.1-q27.2区域，包含8个外显子和7个内含子。人F9基因缺陷导致血浆中FIX蛋白缺失或功能障碍是导致血友病B的根本病因。目前，血友病患者的主要治疗措施是进行替代治疗(protein replacement therapy,PRT)，包括预防性或治疗性反复输注重组凝血因子IX或血浆制品等。这些治疗措施虽然在一定程度上改善了患者的生存率和生活质量，然而不具备治愈性。与此同时，长期治疗的昂贵费用($100-300,000/年)以及输血或静脉注射引发的感染等并发症都给患者带来诸多弊端。

基因治疗是当前最有潜力治愈血友病的策略之一。通过基因克隆和转移技术，可以有效的把治疗基因转移到基因缺陷细胞以长期稳定地表达功能正常的凝血因子，恢复患者的正常凝血功能，从而达到终身治愈的目的。结合目前血友病基因治疗的基础研究和临床试验进展，发展相对比较成熟的最具有治愈潜力的技术是以腺相关病毒载体(adeno-associated virus，AAV)进行体内基因治疗(In vivo gene therapy)。

2011年和2014年相继发表的世界首例血友病B基因治疗临床试验报道了AAV载体介导基因治疗在10名重症HB患者中取得的显著疗效，部分患者临床症状明显缓解，中断或减少hFIX因子替代品的使用。尽管如此，大多数患者体内的hFIX水平只能达到正常人的1-6％，在高、中、低三个组别中，主要是高剂量组及部分中剂量组的患者取得了较好的临床效应，但相对于>30％的彻底治愈标准还有一定距离。在此临床试验中效果有限的主要原因为：

(1)AAV载体内的表达框架的转录效率还可以进一步提高；

(2)临床试验制剂的生产工艺有待进一步提高，以提高实体病毒颗粒的比例，降低空壳病毒的污染；

(3)患者机体产生了针对载体包壳蛋白的免疫效应。这种免疫效应虽然可以通过免疫抑制治疗进行控制，但在一定程度上导致了AAV载体被宿主机体清除。

综合以上，进一步改进优化基因治疗血友病B的生物载体并进行临床转化，对于填补国内在此领域的空白有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝脏特异性转录调控序列及其应用。

本发明的另一目的在于提供一种包含肝脏特异性转录调控序列的腺相关病毒载体，该腺相关病毒载体可以用于血友病的基因治疗。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的肝脏特异性转录调控序列，其特征在于，所述的调控序列包含白蛋白调控序列和转甲状腺素蛋白调控序列。

在另一优选例中，所述的白蛋白调控序列包括转录因子HNF-1和C/EBP的结合位点。

在另一优选例中，所述的转甲状腺素蛋白调控序列包括转录因子HNF-1、HNF-3、HNF-4、和C/EBP的结合位点。

在另一优选例中，所述的转录因子为肝脏特异性转录因子。

在另一优选例中，所述的肝脏特异性转录调控序列为任选自下组的多核苷酸：