[发明专利]绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体及构建方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，提供了一种绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体及构建方法和应用。本发明提供的绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体，含有双荧光素酶报告基因载体和TNPO1基因的3’UTR区序列片段，该重组载体可以稳定表达绵羊TNPO1基因，作为一个生物模块用于各种相关技术领域；本发明提供的构建方法操作简便，可以通过筛选基因准确得到带有目的基因的重组载体，并且重组载体可以稳定表达目的基因；本发明提供的重组载体可以用于检测TNPO1基因表达活性，同时筛选得到靶向调控TNPO1基因的miRNA‑21，miRNA‑21负调控抑制TNPO1基因表达。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体及构建方法和应用。

背景技术

TNPO1基因编码具有多个结构域的转运蛋白1(Transportin1)，Transportin1是转运蛋白家族中的一个重要因子，研究表明，Transportin1在细胞核与细胞质转运过程中发挥相当大的作用，在过去的几年里，在核定位信号(NLSs)中作用的研究取得了很大的进展，使其成为多种生物学过程的分子基础。NLSs可以通过Transportin1参与多种组织、结构和序列的变化。Transportin1除了上述作用外，还与细胞发育过程中的有丝分裂、纤毛活动及细胞质RNA粒化有关。有研究表明，Transportin1在特有蛋白进入纤毛过程中起到作用，并且最终发现TRN1存在于初级纤毛中。研究发现NLSs依赖于转运蛋白突变引起蛋白错配，引起肌萎缩外层硬化，说明转运蛋白在人类健康中的重要性。

MicroRNA(即miRNA)是由18-25个核苷酸组成的一类内源性、短序列非编码单链RNA，它由DNA转录产生，不翻译蛋白质，通过和mRNA3'UTR区结合来调控目标基因的表达。miRNA主要是通过5'端被称为种子序列的7nt序列与位于靶mRNA 3'UTR的miRNA调控元件相互作用以识别靶mRNA。作为一种转录后调控小分子RNA，在动物中主要通过与靶mRNA的3'UTR区特异性互补配对，抑制靶mRNA翻译或引起靶mRNA的降解，从而参与调控细胞分化、组织发育、肿瘤发生发展等多种生命过程。成熟的miRNA可同时封闭多个靶基因的翻译，干预调节miRNA可改变多个靶基因的表达水平，且干预调节效率很高。miRNA作为转录后基因调控的一种方式，在生物体内形成一个调控网络，由于miRNA调控涉及的方便广，调控控作用明显，本身序列短，便于操作和研究，越来越受到人们对其生物学功能研究的重视。研究调控靶mRNA的miRNA对了解生物体内调控代谢机制具有重要意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体，本发明的第二目的在于提供上述绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体的构建方法，本发明的第三个目的在于提供上述绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体在检测绵羊TNPO1基因表达活性中的应用，本发明的第四个目的在于提供绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体在筛选调控绵羊TNPO1基因的microRNA上的应用，本发明的第五个目的在于提供上述绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体在检测microRNA调控绵羊TNPO1基因的调控机制中的应用，以缓解现有技术中对绵羊TNPO1基因的调控机制的研究内容和方法不完善的问题，提供一种绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体及构建方法，同时预测调控绵羊TNPO1基因的miRNA。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体，所述绵羊TNPO1基因双荧光素酶报告基因载体含有双荧光素酶报告基因载体和TNPO1基因的3’UTR区核苷酸序列片段。

进一步地，所述双荧光素酶报告基因载体为pmiR-RB-REPORT^TM。