[发明专利]一种荧光生物传感器、制备方法及其检测有机磷农药的应用

权利要求书

1.一种荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1）、将PolyT30-DNA溶液加入缓冲溶液中，加入抗坏血酸钠溶液，培养后，加入CuSO₄溶液，继续培养；

2）、向步骤1）所得体系中加入酪氨酸酶溶液和有机磷农药的混合溶液，培养，制备信号“打开”的荧光生物传感器；

PolyT30-DNA溶液：缓冲溶液：抗坏血酸钠溶液：CuSO₄溶液：酪氨酸酶溶液：有机磷农药体积比为2:88:50:50:10；

所述PolyT30-DNA溶液浓度为1μM；

所述缓冲溶液为10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸) PH=7.6的缓冲溶液；

所述抗坏血酸钠溶液浓度为8.0 mM；

所述CuSO₄溶液浓度为800μM；

所述酪氨酸酶溶液浓度4U/mL；

所述有机磷农药浓度0.1ng/L- 1000ng/L；

所述传感器对有机磷农药0.1ng/L- 1000ng/L有灵敏的检测；

所述PolyT30-DNA序列为携带聚胸腺嘧啶的单链DNA序列： PolyT30：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中第一步培养为20℃-50℃培养5-10min，第二步培养是指在20℃-50℃培养10-30min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）具体为：将2μL的PolyT30-DNA溶液加入88μL的10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸) PH=7.6的缓冲溶液中，然后加入50μL抗坏血酸溶液，37℃培养10min后，加入50μL的硫酸铜溶液，20℃-50℃培养10-30min。

4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，步骤2）所述培养为：20℃-50℃培养10-30min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2）具体为：向步骤1)体系中加入10μL酪氨酸酶和有机磷农药混合溶液，20℃-50℃培养10-30min。

6.一种采用权利要求1-5项任意一项所述的方法制备得到的荧光生物传感器。

7.一种权利要求6所述的荧光生物传感器检测机磷农药的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，具体检测方法为：

1）、将PolyT30-DNA溶液加入缓冲溶液中，加入抗坏血酸钠溶液，培养后，加入CuSO₄溶液，继续培养；

2）、向步骤1）所得体系中分别加入酪氨酸酶溶液和不同浓度有机磷农药的混合溶液，培养，不同浓度的有机磷荧光强度不同，构建线性关系，实现了对有机磷农药检测。