[发明专利]一种具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法

说明书

本发明公开了一种具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法，采用本发明的提取方法对石仙桃多糖进行水法提取，包括将石仙桃恒温水浴，醇沉冻融，得到第一粗提物，再对第一粗提物进行脱蛋白得到第二粗提物，然后柱层析分离纯化，得到最终产物，上述方法提取石仙桃多糖省时，节能，且纯化多糖的得率高，提取的多糖具有较好的抑制结肠癌细胞生长的作用。

技术领域

本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法。

背景技术

石仙桃(Pholidota chinensis Lindl)又被称作石橄榄、石上莲、石穿盘、石庾肉等，它是一种常见的药用兰科石仙桃属植物，药用的部位是假鳞茎或者全草，主要分布在中国东南部。石仙桃的鳞茎作为其主要部分，具有抗炎、镇痛和止咳的效果。石仙桃鳞茎中有多种生物活性物质，经本实验室研究发现，石仙桃多糖具有抑制人结肠癌细胞caco-2增殖的作用，因此对于石仙桃鳞茎多糖的提取方法有必要进行深入研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法。

本发明的技术方案如下：

一种具有抑癌作用的石仙桃多糖的提取方法，包括如下步骤：

(1)取石仙桃鳞茎部分，充分晒干后，称取干燥的石仙桃鳞茎样品放入蒸馏水中，该石仙桃鳞茎样品与蒸馏水的质量比为1∶28～32，恒温水浴锅92～95℃水浴提取2.5～4h，3000～4000r/min离心4～6min，去除杂质，得到提取液；

(2)将步骤(1)所得的提取液用旋转蒸发仪65～75℃浓缩，待浓缩液冷却至室温后加入3～5倍体积无水乙醇，置于3～5℃冰箱内保存10h以上，3000～4000r/min离心4～6min，弃上清，取沉淀；

(3)用蒸馏水溶解步骤(2)所得的沉淀，反复冻融，3000～4000r/min离心4～6min除去杂质，然后置于真空冷冻干燥机干燥，得到第一粗提物，该步骤的反复冻融的条件为：冷冻温度为-22～-18℃，溶解温度为45～55℃，重复4～6次；

(4)取上述第一粗提物称重，按照1∶24～27的质量比充分溶解于蒸馏水中，按总体积1/4加入Sevage试剂，充分振荡1.5～2.5h，3000～4000r/min离心8～15min，物料分三层，中间层是固体状物质，收集上层清液，然后对中间层和下层的物料重复该步骤进行处理至中间层无固体状游离蛋白为止，用旋转蒸发仪对上述上层清液浓缩得浓缩液，在该浓缩液中加入3～5倍体积无水乙醇，3～5℃静置过夜，然后3000～4000r/min离心4～6min离心取沉淀；

(5)用蒸馏水溶解步骤(4)所得的沉淀，反复冻融后用旋转蒸发仪浓缩，采用截留分子量为3300～3800的透析袋流水透析20～25h，蒸馏水透析20～25h，冷冻干燥得到第二粗提物，该步骤的反复冻融的条件为：冷冻温度为-22～-18℃，溶解温度为45～55℃，重复4～6次；

(6)用DEAE-Sepharose CL-6B层析柱对第二粗体物进行纯化后，再经过透析和冷冻干燥，得到所述石仙桃多糖。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)为：取石仙桃鳞茎部分，充分晒干后，称取干燥的石仙桃鳞茎样品放入蒸馏水中，该石仙桃鳞茎样品与蒸馏水的质量比为1∶30，恒温水浴锅95℃水浴提取3h，3500r/min离心5min，去除杂质，得到提取液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)为：将步骤(1)所得的提取液用旋转蒸发仪70℃浓缩，待浓缩液冷却至室温后加入4倍体积无水乙醇，置于4℃冰箱内保存10h以上，3500r/min离心5min，弃上清，取沉淀。