[发明专利]一种重组乳酸乳球菌的制备方法及应用有效

专利信息
申请号: 201711093350.7 申请日: 2017-11-08
公开(公告)号: CN107653260B 公开(公告)日: 2020-11-17
发明(设计)人: 刘志刚;卢迈新;蔡玉臻;可小丽;张德锋;曹建萌 申请(专利权)人: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
主分类号: C12N15/74 分类号: C12N15/74;C12N15/31;A61K39/09;A61P31/04
代理公司: 广州三辰专利事务所(普通合伙) 44227 代理人: 范钦正
地址: 510380 广东*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 重组 乳酸 球菌 制备 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种重组乳酸乳球菌的制备方法,其特征在于:所述重组乳酸乳球菌在细胞内表达或分泌表达罗非鱼无乳链球菌表面免疫原性蛋白Sip;所述乳酸乳球菌为Lactococcuslactis NZ9000菌株;所述罗非鱼无乳链球菌Sip蛋白去除了信号肽区段并添加了组氨酸标签序列;罗非鱼无乳链球菌Sip基因分别通过插入pNZ8124分泌型载体和pNZ8148非分泌型载体导入乳酸乳球菌;pNZ8124-Sip载体中重组Sip基因的核酸序列如序列1所示,pNZ8124-Sip载体中重组Sip蛋白的氨基酸序列如序列2所示,pNZ8148-Sip载体中重组Sip基因的核酸序列如序列3所示,pNZ8148-Sip载体中重组Sip蛋白的氨基酸序列如序列4所示。

2.根据权利要求1所述一种重组乳酸乳球菌的制备方法,其特征在于:所述重组Sip蛋白由乳酸链球菌素Nisin诱导表达,诱导条件为100ng/mL Nisin诱导4h。

3.一种重组乳酸乳球菌的应用,其特征是应用于制备一种罗非鱼源无乳链球菌的乳酸菌活载体口服疫苗,其活性成分为权利要求1-2中任一所述的重组乳酸乳球菌,在权利要求2中所述诱导条件下诱导后获得,其口服免疫浓度为2.24×1010 CFU/ mL,口服剂量为100μL。

4.根据权利要求3所述一种重组乳酸乳球菌的应用,其特征是所述乳酸菌活载体口服疫苗能够刺激罗非鱼产生无乳链球菌特异性抗体,并能够有效提高罗非鱼抗无乳链球菌感染的能力。

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