[发明专利]一种猪圆环病毒3型灭活苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种猪圆环病毒3型灭活苗及其制备方法，涉及兽用生物制药领域。猪圆环病毒3型毒株，命名为PCV3‑BJ23，保藏号为CGMCC No.13855。本发明包括以下技术步骤：（1）猪圆环病毒3型病毒PCV3‑BJ23株的分离鉴定；（2）用PCV3‑BJ23株制备疫苗；（3）猪圆环病毒3型灭活苗的安全试验、抗体水平检测试验、效力试验。目前市场上无猪圆环病毒3型商品苗，本发明提供的猪圆环病毒3型灭活苗具有较好的安全性，可以诱导猪产生免疫保护效果，符合国家兽医生物制品标准。

技术领域

本发明属于兽用生物制药领域，具体涉及一种猪圆环病毒3型疫苗及其制备方法。

技术背景

猪圆环病毒3型（Porcine circovirus type 3, PCV3）能引起猪的皮炎肾病终合征（PDNS）、繁殖障碍及心脏和多系统的炎症反应，首先于2015年在美国报道，随后2016年中国华中与华南地区的八九个省份陆续报道该病的流行与病原的分离鉴定，基于目前该病传播流行的快速以及其较高的致病性，畜牧兽医行业各界对其高度重视，尽早开展针对该病的病原生物学研究与疫苗研制迫在眉睫。

目前，国内尚无猪圆环病毒3型疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪圆环病毒3型病毒及其应用，即一种灭活苗，且免疫原性好的猪圆环病毒3型病毒，从而弥补现有技术的不足。

本发明的猪圆环病毒3型病毒PCV3-BJ23株，2013年9月12日于北京康宝利华生物科技有限公司实验室从河北省某发病猪场分离鉴定。

本发明的PCV3-BJ23株用于制备预防猪圆环病毒3型的疫苗。

本发明的PCV3-BJ23株还用于制备抗体。

本发明所筛选的猪圆环病毒3型病毒PCV3-BJ23株，含量为10^5.5 TCID₅₀/头份，与佐剂ISA206混合后制备的疫苗免疫原性好，抗体产生快，产生的抗体滴度高且维持时间长，免疫剂量小，在产前42天前进行免疫注射可使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫，能够有效抵抗强毒株的攻击，提高仔猪的存活率。

附图说明

图1为 PCV3进行IFA的实验结果，A：细胞对照，B：实验组。

图2为 PCV3 PCR检测结果，通道1：Takara DNA Maker；通道2：阳性对照；通道3：第3代病毒液；通道4：阴性对照。

图3 为母猪免疫不同疫苗后的抗体水平检测。

本发明所选用的猪圆环病毒3型毒株为PCV-3毒株BJ23株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2017年6月7日，保藏号为CGMCCNo.13855。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的病毒进行详细的描述

实施例1：猪圆环病毒3型病毒PCV3-BJ23株的分离鉴定

猪圆环病毒3型病毒PCV3-BJ23株的分离

1）在流行病学调查时，河北某猪场送检仔猪，剖检取淋巴结，按照1:5的比例（重量：体积）加入PBS，反复冻融3次，离心取上清，0.22μm滤膜过滤。

2）按常规方法接种汇合度约50%的改造后的PK15细胞（接种前用pH7.4的PBS洗三次），按照10%的比例接种病毒，37℃吸附1小时，补足细胞维持液（含2% FBS），37℃温箱培养。如此操作盲传至第3代。同时设置空白细胞作为对照。