[发明专利]胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及胃癌的诊断技术领域，特别涉及一种胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用。

背景技术

胃癌是当今最常见的恶性癌症之一，其在中国的发病率和死亡率分别排在所有癌症中的第二位和第三位。目前，对胃癌治疗的最好办法只有早期诊断。统计表明早期胃癌的术后5年生存率可达90％，而晚期胃癌却低于24％。然而，80％胃癌在早期时症状十分不明显，易被忽略或漏诊。当临床上能够得到确诊时，胃癌往往已经发展到了中晚期，导致患者错过了最佳的治疗时机。随着胃镜检查的普及，胃癌的早期诊断率得到了一定的提升，但是胃镜检查为有创性，检查过程中患者较痛苦，而且价格昂贵，单纯胃镜检查无法进行胃癌分期，必须通过活检或术后病理检查，过程较长，这些原因导致其无法成为胃癌人群筛查的理想方法。因此，通过检测生物样本中特定癌症相关标志物早期诊断癌症是最有价值的方法。

所述生物样本包括各种体液。对于许多主要的癌症，体液中蛋白类标志物存在灵敏度和特异性不足的问题。例如，对于胃癌患者体液中最常用的蛋白类标志物cal9-9、ca72-4和癌胚抗原(CEA)只能检测出约15-50％的任一阶段的胃肿瘤，对于早期疾病，降至大约2-11％。而在各种体液中，唾液能以无创方式进行采集，方便、准确且无任何的伦理和医学风险。其次，唾液中所含有的多种氨基酸与胃癌有着密切的关联，这些氨基酸种类众多且化学性质稳定，可作为可靠的胃癌标志物用于反映出早期胃癌和晚期胃癌的差异，因此可以能最大程度消除个体间差异，适合于建立一种通用且可靠的胃癌诊断方法，快速实验现胃癌的早期诊断。

目前尚无利用唾液中的氨基酸作为标志物对胃癌进行诊断。如果能及时诊断胃癌所处的阶段，将有利确定临床治疗方法，对症下药，提高治愈率。然而，现有的利用唾液诊断胃癌方法也无法对早期和晚期胃癌进行有效区分。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种胃癌氨基酸标志物组合、筛选方法及其在胃癌诊断中的应用，本发明中的胃癌氨基酸标志物可用于通过对人体唾液的检测快速诊断出被测试者是否患有胃癌，并能够确定胃癌病毒的发展阶段，诊断无创友好，简便迅速，准确率高，有利于确定临床治疗方案，提高治愈率。

技术方案：本发明提供了一种胃癌氨基酸标志物组合，包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。

本发明还提供了一种胃癌氨基酸标志物组合的筛选方法，利用高效液相色谱-质谱联用仪测定胃癌患者和健康人唾液样本中的代谢氨基酸，并筛选出与胃癌相关的代谢氨基酸作为胃癌氨基酸标志物组合；所述胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。

优选地，所述高效液相色谱的条件为：选用C18色谱柱，流动样为98％的水和2％的乙腈，均为体积百分比，进行梯度活化；流速为0.8mL/min，柱温为室温。最初平衡时间为5min，分析运行时间为25min，室温条件下进行。

优选地，所述梯度活化按照以下条件任意进行：(1)98％的水和2％的乙腈为9.5min；(2)76％的水和24％的乙腈为1.5min；(3)20％的水和80％的乙腈2min；(4)20％的水和80％的乙腈5min；(5)98％的水和2％的乙腈9min。

优选地，所述质谱的条件为：70eV正离子模式，室温条件下进行。

本发明还提供了一种胃癌氨基酸标志物组合在胃癌诊断中的应用，胃癌氨基酸标志物组合包括以下几种或全部的组合：牛磺酸、甘氨酸、谷氨酰胺、乙醇胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、羟赖氨酸、脯氨酸和酪氨酸。

优选地，若在所述牛磺酸、所述甘氨酸、所述谷氨酰胺、所述乙醇胺、所述组氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸、所述脯氨酸和所述酪氨酸中，在被测试者的唾液样本中至少有7种氨基酸标志物的浓度大于50μM，则所述被测试者患有胃癌。

优选地，若所述甘氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸或所述脯氨酸在被测试者的唾液样本中的浓度均大于100μM，则所述被测试者处于胃癌早期。

优选地，若在所述牛磺酸、所述甘氨酸、所述谷氨酰胺、所述乙醇胺、所述组氨酸、所述丙氨酸、所述谷氨酸、所述脯氨酸和所述酪氨酸中，在被测试者的唾液样本中至少有7种氨基酸标志物的浓度在50～100μM之间，则所述被测试者处于胃癌晚期。