[发明专利]一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法

权利要求书

1.一种牙鲆雌核发育四倍体的诱导方法，包括以下步骤：

1)将新鲜的真鲷精子进行灭活处理，得到灭活真鲷精子；

2)将所述步骤1)得到的灭活真鲷精子和新鲜的牙鲆卵子混合，将得到的精卵混合液与15～19℃的海水混合；

3)待所述精卵混合液与海水混合3min后，将所述精卵混合液转移至0～3℃的海水中进行冷休克处理40～50min，得到冷休克处理的精卵混合物；

4)将所述步骤3)中得到的冷休克处理的精卵混合液在15～19℃条件下培育45～71min后，从精卵混合物筛选出浮鱼卵置于压力为550～750kg/cm²的环境中静压处理5～7min，得到静压处理的浮鱼卵；

处理浮鱼卵的压力环境在30s内达到设定压力；所述静压处理后，在5s内泄压至标准大气压；

5)将所述步骤4)中得到的静压处理的浮鱼卵进行流水孵化，得到牙鲆雌核发育四倍体。

2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤1)中灭活处理为紫外线照射；所述紫外线照射的时间为40～60s；所述紫外线照射的剂量为55～92mJ/cm²，所述紫外线的功率为28～32W。

3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤1)中新鲜的真鲷精子进行灭活处理前进行稀释；所述稀释用溶液为林格氏液；所述真鲷精子稀释后的密度为4×10⁶～5×10⁶个/ml。

4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤2)中灭活真鲷精子和新鲜的牙鲆卵子的数量比为1:10～1:20。

5.根据权利要求1或4所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤2)中精卵混合液和海水的体积比为1:8～12。

6.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤5)中流水孵育的时间70～80h，所述流水孵育的温度为15～16℃。

7.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述步骤5)中流水孵育后还包括：对流水孵化得到的鱼苗进行倍性鉴定和亲子鉴定；所述倍性鉴定包括流式细胞仪倍性鉴定或染色体滴片鉴定；亲子鉴定包括微卫星标记鉴定。