[发明专利]一种用于胰腺癌诊疗一体化的纳米探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于胰腺癌诊疗一体化的纳米探针，其特征在于，所述纳米探针选择以survivin mRNA作为肿瘤靶点，通过壳聚糖对三氧化二铁纳米颗粒表面进行修饰及对survivin反义寡聚脱氧核苷酸进行羧基化修饰，在偶联剂的作用下，使壳聚糖修饰的三氧化二铁纳米颗粒与羧基化的survivin反义寡聚脱氧核苷酸进行反应，获得以survivinmRNA为靶点的诊疗一体化纳米探针。

2.权利要求1所述的纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)共沉淀法制备γ-Fe2O3纳米颗粒并用壳聚糖修饰；

(2)制备羧基化survivin反义寡聚脱氧核苷酸；

(3)取羧基化的Survivin反义寡聚脱氧核苷酸，用EDC/NHS溶液室温活化，然后加入壳聚糖修饰的磁性铁纳米颗粒混合并振荡，将得到的混合液磁分离并洗涤，洗去未结合的游离DNA，得到用于胰腺癌诊疗一体化探针，然后重悬于缓冲液中保存备用。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，通过如下方法制备得到壳聚糖修饰的磁性纳米颗粒:

1)配制200mL pH值为1～2的0.01M FeCl3·6H2O和0.006M FeSO4·7H2O的混合溶液，备用；

2)将0.03g壳聚糖粉末溶解于3ml 1％的醋酸溶液中，配制壳聚糖溶液，备用；

3)在氮气的保护下将氨水逐渐滴入步骤1)得到的混合溶液，同时搅拌溶液，混合溶液液的pH值上升到≧9，得到黑色的沉淀物；

4)使用磁分离洗涤法洗涤若干次步骤3)中获得的黑色沉淀物；

5)用0.1M的盐酸调节步骤4)中溶液pH值至2.0至3.0之间，在95-100℃鼓入空气，搅拌1h左右直至溶液变成棕红色，获得γ-Fe2O3纳米颗粒；

6)将步骤5)中的溶液稀释到浓度为3至4mg/mL；

7)将步骤2)中配制好的溶液加入到20ml步骤6)溶液中，室温充分搅拌4h后磁分离法水洗3-4次，洗去游离的壳聚糖；

8)将步骤7)中的溶液，经超声分散后，用0.1M的盐酸调节pH值至4.0-5.0之间，于4℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，通过如下方法制备羧基化survivin反义寡聚脱氧核苷酸：

1)通过化学合成获得序列为5’CTGAGAAAGGGCTGCCAGTCTCAG-3’的反义寡聚脱氧核苷酸；

2)通过共价连接，在其5’端进行羧基化修饰，获得5’COOH-CTGAGAAAGGGCTGCCAGTCTCAG-3’寡聚脱氧核苷酸。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，Survivin反义寡聚脱氧核苷酸与EDC/NHS的摩尔比为1:1至1:10。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，羧基化Survivin反义寡聚脱氧核苷酸与壳聚糖修饰的磁性铁纳米颗粒按照1:10至1:100的摩尔比进行混合。

7.权利要求1所述的纳米探针在制备用于胰腺癌诊疗一体化的试剂中的应用。