[发明专利]双基因融合增强植物抗蚜性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种基于V-ATPase subunit E和COO2 双基因融合增强植物抗蚜性的方法。

背景技术

蚜虫是农业生产中的主要害虫之一，我国小麦主要种植地区小麦生育期间气温升高，出 现“暖冬”，致使蚜虫危害猖獗，每年在小麦生产上因蚜虫及其传播的病毒所造成的经济损失十 分严重。目前植物介导的RNAi技术作为农作物抗虫研究的热点之一，应用前景十分广阔。此 技术就是通过在寄主植物中表达相应昆虫特异基因的dsRNA，昆虫食用寄主植物后，其相应的 基因被沉默而表达量下降，造成昆虫的死亡，从而起到控制害虫危害的作用。因此利用植物介 导的RNAi技术培育抗蚜品种能够达到安全、持久、高效防治蚜虫的目的，具有重要的实际应 用价值。

发明内容

本发明提出一种双基因融合增强植物抗蚜性的方法，利用了V-ATPase通过水解ATP产 生能量从而为各种生命活动提供所需能量以及桃蚜唾液腺酶类基因COO2在蚜虫合成酶过程上 的重要特性，利用基因工程手段获得的抗虫转基因植物具有只对目标害虫有效，而对非危害生 物没有影响的优点，植物表达产生的抗虫物质存在于植物体内，不会对环境造成污染，且成本 低，利于推广。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种具有抗蚜虫功能的基因dsRNA，其具体融合自蚜虫的V-ATPase subunit E和COO2基因片段，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示。

所述的Seq ID No.3，通过将蚜虫的V-ATPase subunit E(Seq ID No.1所示)、COO2基因 (Seq ID No.2所示)以及V-ATPase subunit E和COO2基因部分片段融合片段基因合成。

本发明涉及一种双基因融合增强植物抗蚜性的方法，通过从桃蚜(Myzus×persicae)的 V-ATPase subunit E基因、COO2基因以及V-ATPase subunit E基因和COO2基因部分序列融合 片段分别构建得到具有抗蚜虫功能的基因，通过构建表达载体并将其分别转入农杆菌，以该农 杆菌侵染小麦幼胚，分别在小麦中表达产生V-ATPase subunit E、COO2基因以及V-ATPase subunit E和COO2双基因的dsRNA，从而达到趋避蚜虫的目的。

所述的表达载体，通过构建玉米ubiquitin-1启动子驱动V-ATPase subunit E，COO2基 因以及V-ATPase subunit E基因和COO2融合基因沉默载体，即RNAi载体。

所述的ubiquitin-1启动子具体为：组成型启动子。

本发明涉及一种重组表达载体，即RNAi载体，其基于dsRNA构建得到。

所述的dsRNA包括：

1)由Seq ID No.1所示的在植物中表达的核苷酸和其反向互补序列；

2)由Seq ID No.1所示的在植物中表达的核苷酸和其反向互补序列；

3)由Seq ID No.3所示的在植物中表达的核苷酸和其反向互补序列，由Seq ID No.1所示 的核苷酸和Seq ID No.2所示的核苷酸组成。

所述的抗蚜性包括：

1)在防治蚜虫中的应用或在制备防治蚜虫产品中的应用；

2)在促进蚜虫死亡中的应用或在制备促进蚜虫死亡产品中的应用；

3)在抑制蚜虫生长中的应用或在制备抑制蚜虫生长产品中的应用。

技术效果

本发明的实验证明所得在小麦中表达桃蚜相关基因V-ATPase subunit E、COO2以及 V-ATPase subunit E和COO2融合片段表达cDNA的序列的dsRNA，导致麦蚜产生致死效应， 并且V-ATPase subunit E和COO2融合片段表达cDNA的序列的dsRNA抑制蚜虫效果最佳。

与现有技术相比，本发明对于适用于本发明的植物没有特别的限制，只要其适合进行基 因的转化操作，如各种农作物、花卉植物或林业植物等。

附图说明

图1为本发明pDE1005:proUBI:V-ATPase subunit E+COO2载体构建示意图；

图2为实施例中转ubiquitin-1启动子驱动V-ATPase subunit E+COO2基因T1代小麦PCR 鉴定示意图；