[发明专利]突变基因Nasp在狼疮性模型小鼠自身免疫病发病中的作用及机制

说明书

本发明公开了突变基因Nasp在狼疮性模型小鼠自身免疫病发病中的作用及机制，用基因重组技术来表达和纯化正常的Nasp蛋白质和突变的Nasp蛋白质。然后采用表面等离子共振技术(surface plasmon resonance technology，SPR)测定纯化的Nasp蛋白质结合组蛋白H1，H3，H4和H3/H4四聚体的能力。通过比较正常Nasp蛋白质和变异Nasp蛋白质结合组蛋白的能力，可以判断变异的Nasp蛋白质结合组蛋白的能力是否发生改变。在测定蛋白质相互作用方面，SPR方法非常精确、敏感性高。我们将在体外分析突变的Nasp蛋白质结合组蛋白的能力和对细胞增殖的影响；通过新建四个同类系小鼠模型，体内研究突变基因Nasp对SLE发病的促进作用和效应机制。

技术领域

本发明涉及基因突变技术领域，具体为突变基因Nasp在狼疮性模型小鼠自身免疫病发病中的作用及机制。

背景技术

从狼疮性易感基因亚座Sle2c1rec1中发现只有Nasp基因出现外显子碱基突变，其它蛋白质编码基因的外显子碱基序列正常。值得注意的是突变引起Nasp蛋白质中两个连续氨基酸的改变，即Nasp基因突变导致其蛋白质中第254和255位的氨基酸发生了改变，由缬氨酸亮氨酸序列转换为异亮氨酸苯丙氨酸序列，并且位于该蛋白质的近中心部位的关键功能区内。首先需要解决的问题是该基因突变是否导致Nasp蛋白质功能的变化，比如失去活性，活性的增高或降低等。因为蛋白质是基因功能的最终执行者，回答这个问题是澄清该Nasp基因突变是否是参与自身免疫病的先决条件。因此本项课题的第一个研究目标是用体外实验测定突变基因Nasp的蛋白质功能。

为了确认狼疮性小鼠突变基因Nasp在自身免疫病发病中的作用，我们认为还需要解决两方面的问题。首先，虽然在小鼠狼疮性易感基因亚座Sle2c1rec1c中，我们发现只有Nasp基因的外显子发生了碱基突变，造成了该蛋白质内近中心部位连续两个氨基酸的改变。但是，我们不能排除可能存在其它形式的突变基因及其在狼疮性自身免疫病中的作用，例如由于启动子区碱基变异导致基因转录功能的升高或降低，或者由于内含子与外显子剪接部位碱基突变产生了异常的蛋白质异构体。其次，假如突变基因Nasp的确参与自身免疫病的发病，那么它的作用机制是什么，是引起了免疫耐受的破坏或放大自身免疫反应，还是参与了末端器官的炎症反应。因此，回答这些问题是本项课题的第二个研究目标，通过新品系小鼠的创建及其体内实验研究加以实现。

发明内容

本发明的目的在于提供突变基因Nasp在狼疮性模型小鼠自身免疫病发病中的作用及机制，以解决现有的技术缺陷和不能达到的技术要求。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：用基因重组技术来表达和纯化正常的Nasp蛋白质和突变的Nasp蛋白质。然后采用表面等离子共振技术(surface plasmonresonance technology，SPR)测定纯化的Nasp蛋白质结合组蛋白H1，H3，H4和H3/H4四聚体的能力。通过比较正常Nasp蛋白质和变异Nasp蛋白质结合组蛋白的能力，可以判断变异的Nasp蛋白质结合组蛋白的能力是否发生改变。在测定蛋白质相互作用方面，SPR方法非常精确、敏感性高。

用真核细胞表达载体携带正常Nasp cDNA和基因突变的Nasp cDNA进入小鼠T细胞内并进行高表达Nasp蛋白质，然后测定细胞内DNA量的变化和溴化尿嘧啶(BrdU)掺入水平，来检测细胞增殖反应的程度。通过比较细胞内高表达的正常Nasp蛋白质和突变的Nasp蛋白质对细胞增殖影响的差异有无或程度，来检验突变的Nasp蛋白质的功能是否发生了改变。