[发明专利]猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的三联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供了一种猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的三联灭活疫苗及其制备方法，灭活前，三种病毒的含量均≥10^7.0TCID50/mL，灭活后各个抗原的体积比例为1:1:1。本发明的三联灭活疫苗解决了目前市场上缺少有效的防治猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒病三种疾病的多联疫苗的问题，尤其是解决了缺少近些年新流行的猪δ冠状病毒病的疫苗。该发明的三联灭活疫苗经济实用，简化了免疫程序，能够有效地降低防疫成本，为国内养殖企业同时预防三种疾病的发生提供了一种新的方法。

技术领域

本发明涉及一种动物多联灭活疫苗及其制备方法，特别是指一种猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的三联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是以呕吐、腹泻和脱水为特征的猪肠道传染性疾病。主要是由PED病毒感染引起，该病毒主要通过被感染猪只排出的粪便或污染物经口途径自然感染。各种年龄猪均易感，尤以哺乳仔猪最为严重，病死率可达100％。是影响全球养猪业的最重要病毒之一。

猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)也是引起猪腹泻的一种重要接触性病毒性肠道传染病，发病急，传播快，以引起两周龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率为特征，周龄较大的猪只虽然几乎没有死亡，但是生长缓慢，饲料利用率低，给养猪业造成严重的经济损失。

猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus，PDCoV)也称猪丁型冠状病毒，是一种新型冠状病毒，临床特征主要引起母猪和仔猪的急性水样腹泻。2012年PDCoV首次在香港猪粪便中检测到，随后该病在全球不同地区陆续被发现。我国猪群PDCoV的感染严重，部分地区猪群中腹泻病料样品中PDCoV阳性率超过25％。目前对于PDCoV，没有有效的治疗措施和疫苗。

猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒均属于冠状病毒科病毒，抗原形态相似，这三种病毒引起的疾病在流行病学和病理剖检上也极其相似，临床上较难分辨，而三种病毒彼此又没有共同的抗原性，在免疫学和血清学上相互没有交叉反应。由此可见，同时防控三种疾病显得尤为重要。目前PEDV、TGEV、PDCoV等的混合感染而引起的疾病是全球养猪业的一大问题，对养猪业造成很大的损失。国内已有传染性胃肠炎和流行性腹泻二联疫苗，但是对于PDCoV，仍没有有效的治疗措施和疫苗，因此尽快研制出一种能够有效防治猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的疫苗已成当务之急。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供由本发明人自行分离、保存的猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒，利用三种毒株制备猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的三联灭活疫苗，用于防治猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒三种疾病。

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪δ冠状病毒的三联灭活疫苗，抗原成分在灭活前为猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒，其中，猪流行性腹泻病毒的含量≥10^7.0TCID50/mL、猪传染性胃肠炎病毒的含量≥10^7.0TCID50/mL和猪δ冠状病毒的含量≥10^7.0TCID50/mL。

优选地，本发明的三联灭活疫苗是由猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒灭活后制备获得，灭活后各个抗原的体积比例为1:1:1。

优选地，本发明的猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒的灭活是分别将病毒液按0.01mol/L的比例加入BEI，室温条件下以300r/min磁力搅拌灭活12小时，灭活后按0.7％的体积比加入硫代硫酸钠，继续搅拌30分钟后获得。

优选地，本发明的三联灭活疫苗中含有佐剂，抗原与佐剂的质量比例为1:1。