[发明专利]一种金属离子检测用探针、试剂盒、制备方法、应用

权利要求书

1.一种金属离子检测用探针，其特征在于，所述探针上修饰连接有金属离子脱氧核酸酶序列和与金属离子脱氧核酸酶序列互补配对连接的底物链序列，所述底物链序列的3’端修饰有能够催化化学发光体系产生化学发光的基团分子；

所述金属离子为铜离子；

所述脱氧核酸酶序列为：5’-GGTAAGCCTGGGCCTCTTTCTTTTTA AGAAAGAAC-3’；

所述底物链序列的3’端修饰的基团分子为辣根过氧化物酶HRP；

所述底物链序列为：

5’-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAGCTTCTTTCTAATACGGCTTACC-HRP-3’。

2.如权利要求1所述的金属离子检测用探针，其特征在于，所述金属离子抑制底物链序列3’端修饰的基团分子的催化活性。

3.如权利要求1所述的金属离子检测用探针，其特征在于，所述探针以链霉亲和素修饰的纳米磁珠为固相载体。

4.一种如权利要求3所述的金属离子检测用探针的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1）取链霉亲和素修饰的纳米磁珠，采用缓冲液1清洗后，加入缓冲液1和底物链，室温避光涡旋反应，反应结束后，进行磁分离并采用缓冲液1清洗，得到结合底物链的纳米磁珠；

2）取步骤1）制备的结合底物链的纳米磁珠加入脱氧核酸酶序列和杂交缓冲液，温育反应，反应结束后，得结合脱氧核酸酶序列和底物链的纳米磁珠；

3）将步骤2）制备的纳米磁珠采用缓冲液2进行清洗后，保存在缓冲液2中，即得所述的探针。

5.一种金属离子检测用试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～3任一项所述的探针。

6.如权利要求5所述的金属离子检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测铜离子，包括如权利要求3所述的探针。

7.如权利要求6所述的金属离子检测用试剂盒，其特征在于，还包括化学发光板、化学发光底物液、标准样品、稀释缓冲液、洗涤缓冲液、EDTA溶液、PBST缓冲液、样品消化处理液、pH调节剂。

8.一种如权利要求7所述的金属离子检测用试剂盒在检测血清中铜离子浓度方面的应用，其特征在于，其检测方法包括以下操作步骤：

A：在化学发光板中加入探针，磁分离，用洗涤缓冲液清洗后，加入抗坏血酸室温避光反应，反应结束后磁分离，并用PBST清洗后，加入化学发光底物液，测定化学发光板的发光强度，记为RLU₀；

B：在铜离子标准溶液中加入抗坏血酸，按照步骤A所述的方法在化学发光板中加入含有抗坏血酸的铜离子标准溶液，测定发光强度记为RLU，根据不同铜离子浓度对应的（RLU₀-RLU）/RLU₀的变化，绘制铜离子浓度检测标准曲线，得（RLU₀-RLU）/RLU₀与铜离子浓度之间的对应关系式；

C：测定血清样本总铜含量：取人血清样本加入样品消化处理液进行消化处理后，血清消化液用稀释缓冲液稀释后作为总铜待测样品，按照步骤A同样的方法，在总铜待测样品中加入抗坏血酸后，检测发光强度RLU，带入步骤B获得的（RLU₀-RLU）/RLU₀与铜离子浓度之间的对应关系式中，计算得出血清样本的总铜含量；

测定血清样本游离铜含量：取人血清样本，加入EDTA溶液反应后，用超滤管超滤收集滤液，将滤液加入样品消化处理液进行消化处理后，滤液消化液加入稀释缓冲液稀释后作为游离铜待测样品，按照步骤A同样的方法，在游离铜待测样品中加入抗坏血酸后，检测发光强度RLU，带入步骤B获得的（RLU₀-RLU）/RLU₀与铜离子浓度之间的对应关系式中，计算得出血清样本的游离铜含量。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述稀释缓冲液为含NaCl的0.05mol/LHEPES缓冲液，pH=7.0。