[发明专利]抑制WSSV感染的铁结合蛋白基因Cq-Ferritin及其制备方法与应用

说明书

抑制WSSV感染的铁结合蛋白基因Cq‑Ferritin及其制备方法与应用，涉及红螯螯虾铁结合蛋白基因。将Cq‑Ferritin基因连接到原核表达载体pET32a(+)中，构建红螯螯虾铁结合蛋白pET32a‑Cq‑Ferritin重组表达载体；将所得重组表达载体导入宿主细胞E.coli(BL21:DE3)，并用硫代半乳糖苷(IPTG)对其进行诱导表达，获得表达产物；分离纯化得到的表达产物，超声破碎后通过亲和层析获得较高纯度的红螯螯虾铁结合蛋白。所述红螯螯虾Cq‑Ferritin对白斑综合征病毒的感染具有明显抑制作用，所述红螯螯虾铁结合蛋白在制备抗WSSV类新药和作为动物抗病饲料添加剂中应用。

技术领域

本发明涉及红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)铁结合蛋白基因，尤其是涉及抑制白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)感染的铁结合蛋白基因Cq-Ferritin及其制备方法与应用。

背景技术

白斑综合征病毒是一种引起养殖对虾暴发性流行病的主要病毒性病原。该病毒侵染性和复制能力很强，宿主死亡率可达100％，可侵染对虾的多种组织，且宿主范围很广，对虾、螯虾和蟹类等均可被其感染^[1]。WSSV已成为对虾养殖业的主要危害，因此有效防治WSSV的爆发在水产养殖中具有重要意义。

铁结合蛋白是一类广泛存在于动植物体内的铁贮藏蛋白，是一种保守性较高的多功能多亚基蛋白。脊椎动物的Ferritin由12条H链和12条L链两类亚基组成一个球面大分子，最多可容纳4500个铁原子，而无脊椎动物的铁蛋白只含有一种亚基^[2]。铁在细胞代谢中起着重要的作用，氧的运输、电子传递、DNA复制、光合作用和细胞增殖等细胞代谢过程都与铁的功能密切相关^[3]，同时铁是一些蛋白质的必需成分(例如在酶，辅因子中)^[4]。生物体内，铁结合蛋白的表达水平对维持机体铁平衡具有重要影响^[5]。

铁结合蛋白可通过调节铁的储存和释放来调控铁代谢平衡,在参与核酸和蛋白质等的合成中发挥着重要的作用^[6]。铁结合蛋白可以作为急性时相反应蛋白,参与机体非特异性免疫反应^[7]。铁结合蛋白可储存机体中的过剩铁，避免产生铁中毒^[8]；还具有抗氧化胁迫的功能，防止铁氧化过程中所产生的自由基带来的伤害^[9]。此外，铁结合蛋白也是细胞用来抵抗应激和炎症的一种蛋白^[10]。近年来，人们已不再局限于Ferritin对铁调节的研究，转而更注重于免疫防御功能上的研究。研究表明，注射细菌或LPS均能引起果蝇体内Ferritin的表达上调^[11]；日本囊对虾在WSSV感染后，Ferritin的转录水平显著上升^[12]。因此，Ferritin可能参与了机体免疫系统的响应。

参考文献：

1.Lightner D V.Virus diseases of farmed shrimp in the WesternHemisphere(the Americas):a review[J].Journal of invertebrate pathology,2011,106(1):110-130.

2.Harrison P M,Arosio P.The ferritins:molecular properties,ironstorage function and cellular regulation[J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Bioenergetics,1996,1275(3):161-203.