[发明专利]一种从葛根中提取葛根活性物质的生物制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种葛根粗提物的提取方法，具体涉及一种以保藏号为CCTCC NO：M 2015379的金花菌冠突散囊菌(EurotiumCristatum)LS1菌株为发酵菌株，以低淀粉含量的葛根地上部分的基部膨大茎、葛根皮及葛根块茎的两端切块为原料提取葛根粗提物的生物方法。

背景技术

葛根为药食兼备的植物，因含有12％左右的黄酮类物质，而素有“亚洲人参”之称，具有改善脑部血液循环之效，对因高血压引起的头痛、眩晕、耳鸣及腰酸腿痛等症状有较好的缓解功效，经常饮用葛根茶对治疗高血压具有明显的疗效。

生物转化提取是利用微生物代谢过程中产生的酶使底物进行反应，具有安全有效、低成本、低耗能等优点。微生物特别是真菌具有非常强大的分解转化能力，并能产生丰富的次生代谢产物。近年来已有大量研究证明，生物转化葛根的可行性，例如米根霉和酵母混合菌发酵提取的葛根异黄酮含量明显高于传统提取方法(刘改霞的葛根异黄酮的发酵提取工艺及其抗氧化性研究，南京农业大学,2010年)；添加葛根的灵芝发酵产物对羟自由基和超氧阴离子的清除效果明显比单独灵芝发酵好；利用红曲霉转化葛根可使染料木素与葛根素含量得到提高。

冠突散囊菌(EurotiumCristatum)又名“金花”菌，是茯砖茶渥堆过程中的优势菌，具有多种医疗保健功能，如降脂减肥、抗氧化、抗菌、抗癌等，它可利用单宁与淀粉等物质作为碳源，分泌多种胞外酶，如多酚氧化酶、果胶酶、纤维素酶、蛋白酶等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对上述现有技术的不足，提供一种从葛根中提取葛根活性物质的生物制备方法，该方法利用低淀粉含量的葛根地上部分的基部膨大茎、葛根皮、葛根块茎的两端切块为原料，经微生物发酵后进行提取，所制备的葛根粗提物可用于进一步制备口服液或冲泡饮料，将为开发葛根利用提供新的思路。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种从葛根中提取葛根活性物质的生物制备方法，该方法步骤如下：

(1)取葛根中低淀粉含量部分洗净，切成薄片，沥干表面水后置于灭菌锅中于120℃-125℃干蒸60-120min；

(2)将干蒸后的葛根片干燥至含水量为15％-20％，然后粉碎为绿豆大小的颗粒；

(3)于葛根粒中加入为葛根粒重量1％-3％的金花菌粉，混匀，密封，于25-35℃发酵10-15天；

(4)于发酵后的葛根粒加入至少为葛根粒重量3倍(最好为3-5倍)的1％质量浓度的柠檬酸水溶液浸泡4-8小时；

(5)将浸泡后的葛根粒与柠檬酸的混合物置于提取罐中，于80-90℃提取4-6小时，过滤，滤液备用；滤渣加入至少为滤渣重量3倍(最好为3-5倍)的1％质量浓度的柠檬酸水溶液，于80-90℃提取2-3小时，过滤，滤液备用，滤渣重复提取1次；合并3次滤液，浓缩至未发酵葛根粒重量的1/3，即得葛根活性物质；

其中，上述金花菌粉是以葛根作为培养基质，按1kg培养基质加15-20mL金花菌孢子接种液的比例加入金花菌孢子接种液，于26-30℃发酵5-7d，再于30-32℃发酵3-5天，将发酵产物拌匀，干燥至含水量为5-8％，过80-100目筛，即得；其中，上述金花菌孢子接种液是以保藏号CCTCC NO：M 2015379的金花菌冠突散囊菌(EurotiumCristatum)LS1菌株作为发酵菌株制得的发酵滤液。

上述提及的葛根中低淀粉含量部分为葛根地上部分的基部膨大茎、葛根皮和葛根块茎的两端切块。

上述步骤(2)中干燥的温度为60℃-70℃。上述步骤(5)中的浓缩温度为100-120℃。

上述金花菌粉制作中以葛根作为培养基质中培养基质的具体制备为：取葛根洗净、粉碎，加入为葛根重量25-35％的无菌水，充分混匀成培养基质，于80-100℃干燥1-1.5h，冷却至40-50℃，再于80-100℃干燥1h。

上述提及的金花菌孢子接种液是将金花菌LS1菌株在无菌条件下接种于含改良PDA培养液的培养瓶中，接种量为10％，于28-30℃培养6-8d，再以160-200rpm/min振荡培养瓶18-22min，过滤除去菌丝，即得。所制得的金花菌孢子接种液的浓度为4.5×10⁸-5×10⁹个/mL。其中，该改良PDA培养液是取马铃薯300g，加水煮20min，过滤，于滤液中加入葛根40g后煮沸，5min后过滤,所得滤液加入葡萄糖20g后补水至1000mL制得。