[发明专利]一种检测噻苯咪唑的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测噻苯咪唑的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域。本发明的试剂盒由包被有噻苯咪唑‑载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板、噻苯咪唑标准品、噻苯咪唑‑过氧化物酶标记抗体工作液、发光底物液、浓缩样品稀释液、浓缩洗涤液组成。所述噻苯咪唑‑载体蛋白偶联物是将噻苯咪唑与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，浓缩洗涤液含有0.05%吐温‑20。与传统的酶联免疫吸附分析法比较，本发明的试剂盒具有更高的灵敏度，且检测时间短、费用低，可用于苹果样品中噻苯咪唑的残留量检测。

技术领域

本发明涉及一种检测噻苯咪唑的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物源性食品中如鸡蛋中的噻苯咪唑含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

噻苯咪唑是目前经常使用的防腐保鲜剂，常用于采收前或采收后的果蔬，经喷雾或浸蘸后的果蔬，不但可以延长贮存时间，还可保鲜、保色。这些食品添加剂具有一定的生物毒性效应，残留量超标将不可避免对人体健康产生影响。我国对这些杀菌剂有明确的残留限量要求团，国家质检总局发布公告，禁止对轻基苯甲酸丙醋等33种产品作为食品添加剂生产、销售和使用，省质监局已停止受理其生产许可申请闭，其中包含噻苯咪唑。

目前，国内外报道的果蔬残留防腐剂的检测方法主要涉及有分光光度法、胶束电动色谱法困、高相液相色谱法、液相色谱串联质谱法、气相色谱串联质谱法等，在各种检测方法的建立，样品前处理是不可缺少的前提条件，尤其是针对痕量分析时，样品前处理是影响分析结果的关键环节，常引起样品检测误差，限制检测灵敏度，尽管提取净化方法有索氏提取、振荡提取、液一液分配、柱层析等技术，虽然这些技术不需要昂贵的设备和特殊仪器，但却是整个分析过程中费时费力、易引起误差的环节；且大量有机溶剂的使用，易造成对环境的污染。因此，需要发明一种工序少、操作简便检测的新方法。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的噻苯咪唑抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测噻苯咪唑的化学发光免疫试剂盒，将为苹果产品中噻苯咪唑药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中噻苯咪唑含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中噻苯咪唑含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测噻苯咪唑的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有噻苯咪唑-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述噻苯咪唑-载体蛋白偶联物是将噻苯咪唑与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、噻苯咪唑标准品；

3、噻苯咪唑-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的噻苯咪唑抗体，所述噻苯咪唑抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；

4、发光底物液：该发光底物液是以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液，分为A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位发光增强剂加鲁米诺货发光增强剂加异鲁米诺，B液为过氧化氢溶液或尿素过氧化氢溶液；

5、2倍浓缩稀释液；

6、20倍浓缩洗涤液；

本发明中，所述的不透明白色酶标板为96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶标板。

本发明中，所述的噻苯咪唑标准品，由一系列不同浓度的噻苯咪唑标准品组成，浓度为0.02~5.12 ng/mL的浓度区间。