[发明专利]一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及应用，所述的单克隆抗体由杂交瘤细胞6B3分泌得到，该杂交瘤细胞已送至CCTCC保藏，保藏编号为：CCTCC NO：C2017204。所述的单克隆抗体效价高，特异性好，并且具有竞争效果，基于该单克隆抗体制备了H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测试剂盒及检测方法，该方法具有快速、稳定、特异性高、灵敏度高的特点，利用该试剂盒对样品进行测试，本方法与HI试验有99％以上的符合率，敏感性为98.7％，特异性为99.3％，相对HI试验，缩短了试验时间，操作步骤更简单，可快速检测样品中是否含有H7亚型禽流感抗体，适合应用于家禽养殖场是否含有H7亚型禽流感病毒抗体的大批量检测。

技术领域

本发明是属于临床免疫学技术领域，更具体地，涉及一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及应用。

背景技术

H7亚型禽流感疫情自2013年出现以来一直没有得到有效的控制。虽然H7N9禽流感病毒还没有进化出人传人的能力，但是禽传人的事例时有发生。2016-2017冬春交接之际我国出现了第五次H7亚型禽流感爆发高峰，这次疫情比以前更为严重，表现为发病时间早和发病率高，并且病毒出现了耐药性突变和毒力增加的现象。针对H7亚型禽流感疫情现状，2017年6月初农业部办公厅发布在两广地区先行开展H7N9免疫工作，为两广地区及全国高效开展禽流感防控工作提供了坚强的技术保障。

H7亚型禽流感推广免疫之后，就面临免疫后抗体水平的监测。常规的检测禽流感抗体的方法是血凝抑制(HI)试验。HI试验对操作人员的专业素质要求较高，过程繁琐，对结果的判定也有较强的的主观性。因此，研制一种H7亚型禽流感抗体检测试剂盒对我们评价疫苗免疫效果以及及时监测鸡群抗体水平显得极为重要。

目前，关于H7亚型禽流感病毒的单克隆抗体的应用相继有报道，主要是在胶体金试纸条、间接免疫荧光、免疫组化等方面的应用，而具有竞争效果的单克隆抗体还未见报道。因此，需要提供一种简便、快速、敏感性高和特异性好，对H7亚型禽流感病毒有竞争效果的单克隆抗体检测试剂盒，为大规模临场检测提供便利。

发明内容

针对上述现有技术中的问题，以便于更简便、快速地对大量样品进行H7亚型禽流感病毒抗体的检测，本发明提供了一株分离的杂交瘤细胞株及由该杂交瘤细胞株分泌得到的抗H7亚型禽流感病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体效价高，特异性好，对H7亚型禽流感病毒抗体有竞争效果。

本发明的另一目的在于提供了所述杂交瘤细胞或单克隆抗体的应用，利用该杂交瘤细胞或单克隆抗体制备H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测试剂盒，该试剂盒具有特异性好，灵敏度高，快速准确的特点。

本发明的另一目的在于提供一种基于上述试剂盒的检测方法，用于H7亚型禽流感疫苗免疫效果的评价及鸡群抗体水平的监测。

本发明的上述目的是由以下技术方案予以实现的。

一株分离的杂交瘤细胞，所述的杂交瘤细胞命名为杂交瘤细胞6B3，保藏编号为：CCTCC NO：C2017204，保藏于中国典型培养物保藏中心。

本发明所述的杂交瘤细胞株6B3的获得是利用灭活的H7-AIV抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术建立抗H7-AIV单克隆抗体杂交瘤细胞库获得，并利用获得的单克隆抗体了建立H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测试剂盒，鉴定待测动物样本是否含有H7亚型禽流感病毒抗体。

杂交瘤细胞6B3在RPMI-1640完全培养基中，在含5％CO2，37℃条件下培养48小时，显微镜下观察，细胞生长良好，呈葡萄串状、集落浑圆透亮，符合杂交瘤细胞的培养特性。