[发明专利]一种扶正愈瘤饮抗肿瘤的方法

说明书

一种扶正愈瘤饮抗肿瘤的方法，昆明种小鼠右腋皮下注射S180瘤株复制移植性实体瘤模型后，扶正愈瘤饮（扶正愈瘤饮由海马、蛤蚧、生水蛭、熟地、紫河车、何首乌、制半夏、黄芪等10多种药物组成）剂量（中药剂量12.4 g/kg），顺铂（剂量为8μg/d），顺珀+剂量中药，连续给药10d;观察抑瘤率及生命延长率。取培养的卵巢癌细胞株SKOV3，加药培养48h后。

技术领域

本发明涉及一种扶正愈瘤饮抗肿瘤的方法，具体地说是以一种扶正愈瘤饮抗肿瘤的方法。

背景技术

目前公知的卵巢癌的治疗效果有了明显提高，肿瘤治疗观念也在变化。不仅注重致病因素，更注重机体的反应性，这种新的治疗观念为中医药抗瘤研究提供了机遇。

发明内容

材料和方法

1、动物和分组；雌性昆明种小鼠153只，体质量（21±2）g，鼠龄8周。全部实验室饲养24h后，以S180瘤株0.2mL小鼠右腋皮下注射，复制移植性实体瘤的荷瘤鼠。第1部分45只，随机分为6组；第2部分108只，随机分为6组，每组18只。两部分均设模型组，扶正愈瘤饮低、高剂量组（中药低、高剂量组），顺铂组，顺铂+低剂量中药组，顺铂+高剂量中药组，除顺铂腹腔给药外，其他均灌胃给药，连续10d。第1部分灌胃10d结束后处死取材进行抗肿瘤实验；第2部分灌胃10d结束后不处死，继续饲养用于生命延长试验。

2、扶正愈瘤饮的制备 扶正愈瘤饮由海马、蛤蚧、生水蛭、熟地、紫河车、何首乌、制半夏、黄芪等10多种药物组成。按处方比例称取中药材，由黑龙江中医药大学第一附属医院制剂室煎制，按人鼠体质量比换算后，低剂量、高剂量扶正愈瘤饮分别以2.4、12.4g/kg剂量灌胃。

3、主要试剂 RPMI-1640培养液、四甲基偶氮唑盐（MTT）试剂盒、刀豆素A（ConA）、脂多糖（LPS）均为Sigma公司产品；酶联免疫吸附（ELISA）法试剂盒为Lifekey公司产品。

4、检测指标；瘤质量及抑瘤率；将第1部分小鼠处死后剥离瘤组织称质量，计算各组瘤质量均值，按下列公式计算抑瘤率：p抑瘤=［（m模型组-m给药组）/m给药组］×100%。生命延长率；第2部分给药结束后常规饲养，观察小鼠一般情况和存活时间，按以下公式计算生命延长率：p生命延长=［t存活，给药组-t存活，模型组）/t存活，给药组］×100%。细胞凋亡检测；取出培养的卵巢癌细胞株SKOV3（购于中国科学院上海细胞生物所细胞库），以2.0×105个/mL的密度接种于96个孔板，每孔1.0mL，随机分为4组：模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、顺铂组，顺铂的浓度为20μg/mL，培养24h后更换含各组药物的培养基，培养48h后采用ELISA法测定450nm处的吸光度（D）值，凋亡细胞越多，D值越高。细胞凋亡情况用富集系数（enrichmentfactor,IEF）表示：IEF=（D实验组-D本底）/D阴性对照组。其中本底指细胞裂解液，阴性对照由试剂盒提供。将培养细胞制成单细胞悬液，取100μL细胞悬液，加入4.0μL染液，轻轻打匀后，取细胞悬液1滴滴在洁净的玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察。计数200个细胞，计算细胞凋亡率：p凋亡=（n凋亡细胞/n总细胞）×100% 。统计学处理；采用SPSS 11.0软件包进行。

结果：各给药组均可不同程度抑制荷瘤鼠的肿瘤生长，其中顺珀组与顺珀+中药组均可显著性降低瘤体质量（P＜0.05或P＜0.01），各中药组及中药与顺铂合用组均可显著性增加体质量（P＜0.05或P＜0.01）。中药与顺铂合用组均可增加荷瘤鼠存活时间（P＜0.05），提高生命延长率。低、高剂量中药组均可诱导SKOV3细胞凋亡（P＜0.05）。

发明目的：卵巢癌的治疗效果有了明显提高，肿瘤治疗观念也在变化。不仅注重致病因素，更注重机体的反应性。这种新的治疗观念为中医药抗瘤研究提供了机遇。扶正愈瘤饮是临床经验用方，辅助恶性肿瘤手术、放化疗，使病人治疗期间的耐受性提高，生活质量明显改善。本发明通过动物模型观察扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用。