[发明专利]用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒。该试剂盒包括标准抗原、捕获抗体和检测抗体；所述标准抗原为人源化HuA21抗体；所述捕获抗体为抗人源化HuA21抗体的抗体1A4，所述检测抗体为经生物素标记的抗人源化HuA21抗体的抗体1C9。本发明所提供的基于双抗体夹心法检测血清中人源化HuA21抗体含量的酶联免疫(ELISA)试剂盒可实现对血清中人源化HuA21抗体含量的准确定量检测，且稳定性好，操作简便，费用也较传统检测方法低廉。因此具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药和技术领域，具体涉及一种用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒。

背景技术

HuA21抗体(中国专利号ZL201410489895.X)是一种高亲和力的全人源化的单克隆抗体，能特异性识别并结合人肿瘤细胞表面HER2抗原，从而使HER2高表达的乳腺癌细胞增殖生长受到抑制。实验结果表明，相对于已经上市的曲妥珠单抗(商品名Herceptin，英文名Trastuzumab/Herceptin)，美国Genetech公司首先开发的抗HER2人源化单克隆抗体药物，HuA21抗体能够引起更强的抗原内吞作用，尤其是在Herceptin耐药性的细胞株中，例如Herceptin耐药性的BT474乳腺癌细胞株中，因此HuA21在抗体靶向药物(比如抗体-化药偶联物ADC)的开发中具有很好的应用前景。不仅如此，HuA21还能抑制HER2的磷酸化，而HER2的磷酸化是HER2活化所必须的，进而抑制HER2下游MAPK,PI3K-Akt信号通路，这一现象在HuA21与Herceptin联用更加明显。而且，HuA21与Herceptin联用能够显著抑制机体肿瘤的发展，这一结果在体内实验和体外实验都得到了证实。因此，HuA21在HER2高表达肿瘤例如乳腺癌的治疗方面具有巨大的应用潜力。

无论是在临床前研究的药理学评价阶段，对抗体药物的药代动力学进行研究，还是在临床阶段以及再后来的治疗阶段，确定药物的治疗窗浓度对患者合理给药等，准确评估HuA21在生物体血液中的浓度都具有极其重要的意义。传统的测量血药浓度的方法主要有气相色谱法(GC)、气相-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)等等。但是这些方法普遍价格高昂，而且需要专业的设备操作人员，分析时间也比较长，难以在临床上开展。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种准确、高效、经济的用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒。

本发明所提供的用于检测血清中HuA21抗体含量的酶联免疫试剂盒，具体可包括标准抗原、捕获抗体和检测抗体；所述标准抗原为人源化HuA21抗体(中国专利号ZL201410489895.X)；所述捕获抗体为抗人源化HuA21抗体的抗体1A4(作为包被原)，所述检测抗体为经生物素标记的抗人源化HuA21抗体的抗体1C9。

在所述试剂盒中，所述抗人源化HuA21抗体的抗体1A4的重链的氨基酸序列具体如SEQ ID No.1所示；所述抗人源化HuA21抗体的抗体1A4的轻链的氨基酸序列具体如SEQ IDNo.2所示。

在所述试剂盒中，所述抗人源化HuA21抗体的抗体1C9的重链的氨基酸序列具体如SEQ ID No.3所示；所述抗人源化HuA21抗体的抗体1C9的轻链的氨基酸序列具体如SEQ IDNo.4所示。

进一步地，所述抗人源化HuA21抗体的抗体1A4是通过将核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示的抗人源化HuA21抗体的抗体1A4的重链的编码基因和核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的抗人源化HuA21抗体的抗体1A4的轻链的编码基因在受体细胞中进行表达得到的。其中，重链编码基因和轻链编码基因可为等摩尔使用。