[发明专利]一种胎盘生长因子的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种胎盘生长因子的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

胎盘生长因子（Placental growth factor，PLGF）的分子结构为糖蛋白同型二聚体分子，其碱基序列与VEGF有高度同源性，53%的蛋白质氨基酸组成与VEGF相同，属于VEGF家族中的新成员。PLGF目前有4种不同蛋白质亚型：PLGF-1、PLGF-2、PLGF-3和PLGF-4，4种亚型均由人类滋养细胞和脐静脉内皮细胞所产生。PLGF在胎盘局部通过自分泌和旁分泌形式调节滋养细胞和内皮细胞的功能。在子宫螺旋动脉重塑过程中，合体滋养层细胞分泌胎盘生长因子（PlGF），促进血管生成，改善血流灌注。妊娠早期胎盘循环未完全建立，胎盘处于相对缺氧状态，此时PIGF水平较低；妊娠10～12周时，绒毛间隙血流建立，胎盘发展至妊娠中期，母体血流增加，氧分压上升，胎盘管生成主要由分支结构向非分支结构转变，而PIGF主要调节非分支血管的生成，PIGF合成也逐渐增加；妊娠28～30周时达到高峰之后胎盘逐渐成熟老化，PIGF水平也随之明显下降。

许多研究表明子痫前期患者PLGF水平较正常妊娠妇女下降，且子痫前期患者的滋养细胞表达PLGF mRNA降低。Rohra等研究结果表明，子痫前期患者血浆中PLGF水平降低，PLGF的合成能力减弱可使滋养细胞增殖和浸润能力减退，造成胎盘缺血、缺氧，导致疾病。子痫前期的临床症状与慢性高血压、肾病, 系统性红斑狼疮、血小板异常性出血、糖尿病血管并发症、妊娠引起的急性脂肪肝等疾病的症状相似，通过检测PLGF水平可以鉴别区分出胎盘源性的子痫前期。

到目前为止，用于检测人血清中胎盘生长因子残留的方法主要有：酶联免疫法（ELISA）、电化学发光法等。但是，酶联免疫法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度不够，只适用于微量物质的检测和鉴定；电化学发光需要使用三个电极才能进行一个未知的、多个电活性样品间复杂反应，电极需要更换而且价格昂贵，由于高浓度的TPA所造成的电化学发光使得电化学发光法具有较高的背景信号等。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测胎盘生长因子的方法具有十分重要的意义。

本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的胎盘生长因子的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种胎盘生长因子的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的磁微粒化学发光方法检测胎盘生长因子的试剂盒，采用磁微粒偶联胎盘生长因子捕获抗体，吖啶酯标记胎盘生长因子检测抗体。试剂盒还包括胎盘生长因子校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与胎盘生长因子捕获抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记胎盘生长因子捕获抗体。

作为本发明进一步的方案，所述磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。

作为本发明进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是胎盘生长因子检测抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记胎盘生长因子检测抗体的缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.20 mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液。

作为本发明进一步的方案，所述的捕获抗体与检测抗体均为单克隆抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的校准品是用含有0.5-5.0% BSA的Tris或PBS或HEPES缓冲液为基质，加入胎盘生长因子纯品配置而成，校准品形态为液态。