[发明专利]一种骨软骨组织快速脱钙试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种骨软骨组织快速脱钙试剂盒及其制备方法。所述骨软骨组织快速脱钙试剂盒包括甲溶液、乙溶液和浓盐酸；甲溶液、乙溶液和浓盐酸的体积比为1:1:(0.1—0.3)；每4mL所述甲溶液的配制方法是：将0.8—1.2g柠檬酸钠加入4mL生理盐水中，充分溶解后即得；每4mL乙溶液的配制方法是：取体积百分比浓度为4％的多聚甲醛2.5—3.5mL，然后加入0.5—1.5mL甲酸，使总体积为4mL，即得。本发明所述骨软骨组织快速脱钙试剂盒配制简便、脱钙时间短、脱钙充分且不损伤组织，可广泛应用于临床和科研中骨软骨组织脱钙。

技术领域

本发明涉及一种骨软骨组织快速脱钙试剂盒及其制备方法。

背景技术

骨组织是由细胞、基质和纤维构成的一种质地坚硬的结缔组织，骨组织中沉积的无机盐以羟基磷灰石形式存在，其主要成分为磷酸钙和碳酸钙。在临床、教学和科研中，对骨组织直接进行切片较为困难。若要观察骨及软骨组织中软骨结构、骨胶原纤维、细胞等情况，则必须对骨组织进行脱钙处理，除去组织中的钙质，同时又要保护骨组织和软骨组织的正常形态、多糖及骨细胞结构，达到“组织保真”目的。因此脱钙是骨软骨组织切片中极为常用的技术，也是至关重要的环节，脱钙方法恰当与否将直接影响骨与软骨组织结构完整性、细胞抗原活性和组织染色效果。

脱钙技术广泛应用于骨关节炎、风湿性关节炎等多种疾病的临床和基础科学研究。以小鼠膝关节为例，正确的脱钙处理后，进一步对其进行梯度脱水、透明、石蜡包埋、切片，进而可进行后续苏木素-伊红(HE)染色、番红固绿染色及免疫组化、免疫荧光等多种实验检测，以对分析膝关节组织结构、细胞形态、胞外基质蛋白、软骨细胞抗原表达等情况。因此，脱钙技术是一系列科学研究的先决条件和关键步骤。

然而目前临床及基础科研中常用的脱钙液均存在明显缺陷和不足；如普遍使用的乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙液虽然基本不对骨软骨组织结构造成损害，但存在脱钙速度十分缓慢(以10％EDTA为例，使小鼠膝关节完全脱钙至少需要4周，大鼠至少需要8周)、脱钙过程中需要多次更换脱钙液、脱钙后组织会变硬等缺点；而硝酸类的脱钙液虽然脱钙速度较快(以10％硝酸溶液为例，大、小鼠膝关节完全脱钙需12-24小时)，但该类脱钙液对组织结构及细胞抗原结构损害较大，且存在脱钙后细胞核不能着色等缺点；另外含甲酸、铬酸及醋酸类的脱钙液也普遍存在脱钙时间长、不易判断脱钙终点、及易使组织脱钙过度等缺陷。

综上所述，骨软骨组织不能高效率、高质量脱钙是临床及科研中亟待解决的难题。传统脱钙液普遍存在脱钙时间和脱钙效果两方面不可兼得的弊端，严重限制了临床和科研检测的进程，影响了实验检测结果的真实性。因此如何突破目前骨组织及软骨组织脱钙技术的困境，同时探索更为合适的脱钙方法是非常迫切的科学问题。

发明内容

本发明旨在针对现有传统脱钙液的脱钙时间过长及对组织损伤较大等缺陷，提供一种新型骨软骨组织快速脱钙试剂盒及其制备方法，该新型脱钙试剂盒脱钙快速，且具有保证骨软骨组织正常结构、细胞形态、细胞抗原活性及组织染色等优良特点，适用于各种骨组织和软骨组织的相关实验。

为实现本发明的技术目的，本发明提供的技术方案为：

所述骨软骨组织快速脱钙试剂盒包括甲溶液、乙溶液和浓盐酸；甲溶液、乙溶液和浓盐酸的体积比为1:1:(0.1—0.3)，优选为1:1:0.2；每4mL所述甲溶液的配制方法是：将0.8—1.2g，优选为1g柠檬酸钠加入4mL生理盐水中，充分溶解后即得；每4mL乙溶液的配制方法是：取体积百分比浓度为4％的多聚甲醛2.5—3.5mL，优选为3mL，然后加入0.5—1.5mL，优选为1mL甲酸，使总体积为4mL，即得。

上述骨软骨组织快速脱钙试剂盒的制备方法包括如下步骤：

(1)配制甲溶液：每4mL所述甲溶液的配制方法是将0.8—1.2g，优选为1g柠檬酸钠加入4mL生理盐水中，充分溶解后即得；