[发明专利]4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了通式(Ｉ)所示的4‑丹磺酰胺‑吲哚类荧光探针及其制备方法与应用，该荧光探针的结构是在4‑丹磺酰胺‑吲哚母核的基础上连接一个烃基链而成。由于丹磺酰胺的存在，这类化合物具有荧光特性；由于烃基取代吲哚环的存在，该类化合物可以快速渗透到活的肿瘤细胞中，并且形成特征鲜明的细胞质染色而细胞核不染色的荧光图像；但是对于死亡的肿瘤细胞，该类化合物则表现为完全不同于活细胞的荧光染色特征，因此可以用于生物医学相关行业中肿瘤细胞活性的检测。(Ｉ)。

技术领域

本发明属于化学分析检测技术领域，具体而言，涉及一种4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针及其制备方法与应用。

背景技术

活细胞由于其本身存活的需求，细胞通过完整的细胞膜与外界进行隔离，从而形成细胞内稳定的生理环境，包括：pH值、营养成分、各种物质成分比。当细胞死亡的时候，尽管细胞死亡可以通过不同的方式，如凋亡、坏死和自噬等，而每种死亡形式都有特殊的信号通路启动和调控，但是细胞死亡过程都涉及到细胞内环境的变化，并且都要经历一个形态学的变化。总的来说，细胞死亡时形态变化主要包括细胞形状改变、细胞基质变得紧密、细胞核收缩和细胞膜破裂等。

区分肿瘤活细胞与死细胞的生物医学意义非常重要。对于生物医学研究中，如何快速准确的检测出活细胞与死细胞对于生物医学研究具有重要的意义。例如，在药理评价中，简单而准确的检测细胞是死的还是活的十分重要。同时，在进行临床病理筛查中，如果能够快速的区分的肿瘤细胞是否是死亡或者活得也非常的重要。一个好的区分死亡细胞或活细胞的方法应该是经济、简便、快速、灵敏、精确和具有普适性。目前市场上的细胞活性的检测方法都不能满足上述所有要求。

根据检测的原理，细胞活性的检测方法主要可以分为两大类，其一为基于细胞活性(生化酶学活性)的分析检测，比如MTT和Alamarblue等。这类方法目前应用比较广泛，但具有一定的局限性。这类检测细胞活性的方法可能会受到筛选化学试剂的影响。例如，MTT化合物的环状结构可以被具有还原活性的化合物给打开，造成检测的假阳性；另外有些生化检测方法仅局限于检测某种特定的细胞死亡方式，如检测Caspase-3的活性来确定细胞凋亡情况。总的来说，通过检测细胞的活性来筛查肿瘤细胞的死活，这种方法也不是很敏感，对于含有少量的肿瘤细胞不适用。

第二种为基于细胞形态变化的分析检测。形态学鉴定被广泛用于检测细胞死亡。光学显微镜观察细胞形态变化是最简单和精确的活细胞与死细胞的鉴定方法。细胞形态的变化标志着细胞死亡的启动。在科学研究的早期，科学家发现和定义细胞死亡主要是通过在光学显微镜下观察细胞形态的变化。而直到现在，通过形态变化鉴定细胞死亡是定义细胞死亡的一个金标准。但是这种方法具有很大的局限性，这主要体现在，在可见光下，细胞通常处于一个透明的颜色，同时很难于周围的结缔组织或者组织培养液进行区分。对于活细胞的活体检测，这就尤其困难。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针及其制备方法与应用，具有低细胞毒性并较快穿透活细胞的细胞膜，特异性地对活细胞细胞质进行荧光染色的特点。相比较，这类化合物对于死亡细胞的染色则在荧光形态上明显不同于活细胞的染色，从而能够用于细胞活性的检测。

本发明提供了通式(Ｉ)所示的4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针。

其中，R选自甲基、乙基、丙基、丁基和戊基。

本发明涉及的一部分4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针的名称和结构式列在表Ⅰ中。

本发明还提供通式I所示4-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针的制备方法：