[发明专利]具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白BTN3A3-Ig及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白BTN3A3‑Ig及其制备方法与应用。本发明通过阻断LSECtin与细胞表达的BTN3A3之间的相互作用从而达到抑制肿瘤进程目的的融合蛋白，命名为BTN3A3‑Ig，是将人BTN3A3与人IgG1通过连接肽连接后获得的重组蛋白，能够阻断LSECtin与BTN3A3之间的相互作用，从而抑制肿瘤的发生与发展。本发明的融合蛋白BTN3A3‑Ig为肿瘤的免疫蛋白治疗提供了一个新的思路，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物技术领域中的融合蛋白，特别是涉及一种具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

全球肿瘤发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。目前，对于肿瘤的治疗手段主要包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗、靶向治疗及中医药辅助治疗等。困扰肿瘤治疗的根本原因是肿瘤具备一定的耐药性及复发能力。研究表明，导致肿瘤具有耐药性以及复发能力的根本原因在于肿瘤细胞干性的维持与提升，因此，肿瘤细胞干性的靶向性治疗日益成为研究的热点。肿瘤细胞的干性受基因多样性、表观遗传以及肿瘤微环境三个因素调控。鉴于肿瘤微环境因素促进肿瘤细胞干性依赖细胞间交互作用，因此，认识并挖掘促进肿瘤细胞干性的膜蛋白相互作用分子对，筛选抑制该类膜蛋白间相互作用的物质，有望为肿瘤细胞干性的靶向性治疗提供新思路。

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中存在的巨噬细胞的总称，是肿瘤微环境中浸润免疫细胞的重要组成部分。已有研究显示，肿瘤相关巨噬细胞能够通过多种途径促进肿瘤进程，包括抑制肿瘤免疫反应、促进肿瘤免疫耐受环境的形成、促进肿瘤组织血管生成等。鉴于肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤进程现象明确，清除肿瘤相关巨噬细胞、促使肿瘤相关巨噬细胞向免疫激活方向转化已成为潜在的肿瘤治疗方法。

LSECtin(Liver Sinusoidal Endothelial Cells lectin)是Ⅱ型跨膜糖蛋白，位于人类19p13.3，是C型凝集素家族的新成员。已知LSECtin蛋白功能包括在黑色素瘤中负调节T细胞免疫反应，促进埃博拉病毒引发的炎性反应，抑制CTL依赖的HBV病毒清除，促进结肠癌肿瘤细胞肝转移，发明人贺福初、唐丽等之前发现LSECtin可能作为黑色素瘤免疫治疗的靶点(CN104906575A，2014100898325)；治疗和/或预防埃博拉病毒的靶点(CN107019703A，2016100731468)；抗丙型肝炎病毒感染药物作用靶点(CN101152558，2007101755278)；还发现LSECtin或含有LSECtin的融合蛋白可应用于制备抑制癌细胞向肝转移的药物，LSECtin蛋白及其融合蛋白能粘附结肠癌细胞、抑制结肠癌细胞往肝脏的归巢性迁移，成为抗粘附治疗肿瘤肝转移的一个新靶标(CN101732715A，2008102257147)。

发明内容

本发明提供了一种能够阻断LSECtin与BTN3A3之间的相互作用的融合蛋白，从而抑制肿瘤的发生与发展(抑制肿瘤进程)。

本发明所提供的具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白，命名为BTN3A3-Ig，是将人BTN3A3与人IgG1通过连接肽连接后获得的重组蛋白。

具体来讲，所述融合蛋白BTN3A3-Ig是下述氨基酸残基序列之一：

1)序列表中的序列1；

2)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抑制肿瘤进程活性的蛋白质；

3)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有抑制肿瘤进程活性的蛋白质，新蛋白质与序列1同源性达到80％或更高。

其中：序列表中的序列1由490个氨基酸残基组成，自氨基(N)端第1位为起始密码子，自氨基端第2-15位为信号肽，自氨基端第16-262位为人BTN3A3，自氨基端第263-266位为连接肽(linker)，自氨基端第267-490位为人IgG1。