[发明专利]一种木犀草素-甘草酸共轭牛血清白蛋白载药纳米粒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种木犀草素‑甘草酸共轭牛血清白蛋白载药纳米粒及其制备方法和应用，此木犀草素‑甘草酸共轭牛血清白蛋白载药纳米粒是通过甘草酸化学修饰牛血清白蛋白获得甘草酸共轭牛血清白蛋白的载药纳米粒系统，并使木犀草素包被于所述的甘草酸共轭牛血清白蛋白的载药纳米粒系统内形成；其中，具有肝靶向性的甘草酸共轭牛血清白蛋白的载药纳米粒作为载体，木犀草素作为抗肝癌原料药。本发明可改善木犀草素和载药纳米粒子的溶解性、稳定性、靶向性，以提高其生物利用度和抗肝癌药效。纳米粒包封率提高至30.33％。在体外细胞水平上，GL‑BSA‑Lut‑NPs与Lut相比，药物水溶性、吸收性、抗肿瘤药效等均已大幅度显著提高。

技术领域

本发明涉及纳米生物技术领域的高分子功能化纳米材料，特别地，涉及一种木犀草素-甘草酸共轭牛血清白蛋白载药纳米粒及其制备方法和应用。

背景技术

木犀草素(Luteolin,Lut)属于天然黄酮类化合物，存在于多种蔬菜、水果和中草药中，具有抗氧化、抗过敏、抑菌消炎、免疫调节等多种药理学作用，临床主要用于解痉祛痰、治疗心血管和神经系统等疾病。目前国内外研究发现，木犀草素对多种实体瘤和腹水癌都有明显抑制作用，具有作为抗肿瘤药物的广泛应用前景。但木犀草素作为抗肿瘤药物在治疗上仍有很多问题，如难溶性、吸收性差、无靶向性等，从而限制了其长期应用，因此需研究开发一种新剂型来解决以上问题。天然单体木犀草素(luteolin)结构式如下：

甘草酸(Glycyrrhizin,GL)是从甘草根中提取出的最主要活性成分，由两分子的葡萄糖和一分子的甘草次酸构成的五环三萜皂类。甘草酸具有抗过敏、降压、抗衰老、抗炎、抑制癌细胞生长等作用，同时也具有良好的保肝护肝作用。有研究表明，肝脏能够大量摄入甘草酸，系肝细胞表面有甘草酸受体，且在肝肿瘤细胞中高表达。因此，很多药物载体与甘草酸偶联以期得到具有肝靶向的载药系统。

而白蛋白是一种主要来源于血液的内源性大分子常被选择作为药物载体，由于白蛋白的一级结构中有大量的氨基酸残基，为一些小分子(配体)提供结合位点。目前有许多关于胰岛素、抗菌药等药物被牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)包载的报告，但是白蛋白纳米球微球仍主要用于抗癌药物的载体。

现有技术中，存在一种甘草酸偶联的牛血清白蛋白(GL-BSA)冻干粉的制备^[1]，取甘草酸适量，加CBS溶解后配成浓度为0.1mol·L^-1的溶液；另取NaIO₄适量，加水溶解配成浓度为0.1mol·L^-1的溶液。将NaIO₄溶液缓慢加入等体积GL溶液中，搅拌20min，得GL氧化产物溶液，记为GL醛。精密吸取上述制备的BSA-NP 1.0mL，加入上述GL醛4mL，25℃搅拌2h，即得甘草酸表面修饰牛血清白蛋白纳米粒，记为BSA-NP-GL。另外，存在一种甘草酸偶联牛血清白蛋白载药纳米粒的制备^[2]，其研究方案与阿霉素白蛋白纳米粒的制备方案最为近似。将阿霉素1mg与牛血清白蛋白100mg溶解到1mL的蒸馏水中，为了使药物有效吸附到牛血清白蛋白上，在室温下搅拌2h；调节pH值至7～10之间；4mL乙醇以0.5mL·min^-1的速度滴至已经孵化好的药物与白蛋白混合溶液中，继续搅拌，该过程为去溶剂化过程，纳米粒形成；向纳米粒溶液中滴加质量分数为8％的戊二醛水溶液20μL，室温磁力搅12～24h，使纳米粒交联固化，制得固化纳米粒的溶液。将纳米粒溶液以1.5×104r·min^-1的转速高速离心，倾去上清液，加水至原体积，超声。洗涤3次后，真空干燥得固体粉末。

但是木犀草素属天然中药材单体，具备多种药理学活性，且近些年来因其在抗肿瘤应用方面副作用小，安全性高等被广泛关注，但由于其水溶性低，可吸收性不好，靶向性差等限制了其应用。木犀草素中药材单体制备甘草酸偶联牛血清白蛋白载药纳米粒，在技术方案长时间摸索过程中也一直存在着粒径过大、载药量低、体外细胞水平药效提高不显著等缺点。