[发明专利]蛤蚧定喘丸中22种非法添加止咳平喘类药物的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测领域，具体是蛤蚧定喘丸中22种非法添加止咳平喘类药物的检测方法。

背景技术

蛤蚧定喘丸，中成药名。为补益剂，具有滋阴清肺，止咳定喘之功效。主要由蛤蚧，瓜蒌子，紫菀，麻黄，鳖甲（醋制），黄芩，甘草，麦冬，黄连，百合，紫苏子（炒），石膏，苦杏仁（炒），石膏（煅）等组成。其品种主要有水蜜丸、小蜜丸和大蜜丸等。主治虚劳久咳，年老哮喘，气短发热，胸满郁闷，自汗盗汗，不思饮食。

近年来，某些生产企业为片面追求治疗效果和经济利益，在没有经过任何药理和毒理研究的基础上，擅自非法添加化学药物，严重危害人民群众的用药安全。

目前公开文献中也有关于蛤蚧定喘丸中物质含量的检测技术，但还没有关于蛤蚧定喘丸中非法添加的止咳平喘类药物的相关检测技术。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供蛤蚧定喘丸中22种非法添加止咳平喘类药物的检测方法，以考察蛤蚧定喘丸是否添加此类止咳平喘类药物。该法操作简便，检测效率高，一次过柱，一次色谱过程，可同步检测22种止咳平喘类药物，检测成本较低；且该法具有准确率高、重现性好、灵敏度高等优点。

本发明通过以下技术方案实现：

蛤蚧定喘丸中22种非法添加止咳平喘类药物的检测方法，其中所述的非法添加的止咳平喘类药物为茶碱、盐酸氯丙那林、盐酸妥洛特罗、沙丁胺醇、马来酸氯苯那敏、盐酸克伦特罗、地西泮、盐酸丙卡特罗、磷酸苯丙哌林、枸橼酸喷托维林、富马酸福莫特罗、氢化可的松、醋酸泼尼松、昔萘酸沙美特罗、丙酸倍氯米松、盐酸异丙嗪、甲氧苄氨嘧啶、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、咖啡因、右美沙芬和福尔可定等22种止咳平喘类化学药物；其检测方法包括以下步骤：

（1）混合对照品溶液的制备：分别精密称取茶碱、盐酸氯丙那林、盐酸妥洛特罗、沙丁胺醇、马来酸氯苯那敏、盐酸克伦特罗、地西泮、盐酸丙卡特罗、磷酸苯丙哌林、枸橼酸喷托维林、富马酸福莫特罗、氢化可的松、醋酸泼尼松、昔萘酸沙美特罗、丙酸倍氯米松、盐酸异丙嗪、甲氧苄氨嘧啶、盐酸去氯羟嗪、盐酸溴己新、咖啡因、右美沙芬和福尔对照品适量，加乙腈-0.1%甲酸（90：10）混合溶液，制成每种物质含量均为100ng/ml的混合溶液；

（2）样品溶液的制备：取蛤蚧定喘丸样品1～2g，打碎，精密称定，置50 ml量瓶中，加入乙腈-0.1%甲酸（90：10）混合溶液45～55 ml，超声处理1～1.5小时，放冷，加乙腈-0.1%甲酸溶液（90：10）混合溶液至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1ml，置20 ml量瓶中，加入乙腈-0.1%甲酸（90：10）混合溶液至刻度，过0.2μm滤膜；

（3）进行液相色谱-串联质谱分析：分别精密吸取同样体积的混合对照品溶液与样品溶液2～5μl，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，按照一定的色谱条件和质谱条件进行测定，得到LC-MS／MS 谱图；

（4）结果分析：将样品溶液的谱图与混合对照品溶液的谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某对照品的保留时间一致的色谱峰，并且扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的吸收图谱一致，则认定样品中存在该止咳平喘类药物。

所述超声处理条件为：功率550～580W，频率40～45kHz；

所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：MGII C₁₈柱（5µm，4.6 mm×250mm），柱温28～33℃，流速0.8～1.0ml/min；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下列程序进行梯度洗脱：

时间（分钟） 　 流动相A（%） 　流动相B（%）

0～5　　　　　5　　　　　　　95

5～10　　　　 5→10　　　　 　 95→90

10～25　　　10→90　　　　 　90→10

25～30　　　90　　　　　 10

30～32　　　　95→5　　　　　5→95

32～42　　　　5　　　　　95

所述质谱条件为：采用电喷雾电离源（ESI），正离子方式扫描，多反应监测（MRM）方式检测；干燥气温度：350℃；干燥气流速：5L/min；雾化气压力：40（psi）；鞘流气温度：400℃；鞘流气流速：9L/min；毛细管电压：4.0KV；喷嘴电压：1500V；驻留时间：25ms。