[发明专利]同时测定复方丹参片中多种成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中医药检测技术领域，具体是同时测定复方丹参片中多种成分的方法。

背景技术

复方丹参片的处方为丹参 450g、三七 141g、冰片 8g。丹参加乙醇加热回流1.5小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加50％乙醇加热回流1.5小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至适量。三七粉碎成细粉，与上述浓缩液和适量的辅料制成颗粒，干燥。冰片研细，与上述颗粒混匀，压制成333片，包薄膜衣；或压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。丹参片可活血化瘀，理气止痛，用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛。临床上用于治疗心脑血管疾病、冠心病、心绞痛、心肌缺血等各类疾病，其治疗效果已经得到临床的验证。但目前复方丹参片的质量标准仅选取丹参的一、二个活性成分或指标成分进行含量测定，并以其含量多少来判定质量，具有一定的片面性，不完善，缺乏全面有效的质量控制方法。

发明内容

基于此，本发明提供了一种利用HPLC-UV-ELSD法同时测定复方丹参片中多种成分的方法，简化了检验过程，节约了分析时间。

为实现上述技术目的，具体内容如下：

1、仪器、试剂与样品：

（1）仪器：Waters 2695高效液相色谱仪；2487紫外检测器—ALLtech 2000ES蒸发光散射检测器检测；MILLI-PROA纯水处理器。

（2）试剂：丹酚酸B对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号111562-201212，供含量测定用，含量以95.4%计)、丹参酮ⅡA对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110766-200315，供含量测定用)、三七皂苷R1对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110745-200617，供含量测定用)、人参皂苷Rg1对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110703-201128，供含量测定用，含量以93.4%计)、人参皂苷Re对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110754-200822，供含量测定用，含量以88.8%计)、人参皂苷Rb1对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110704-201122，供含量测定用，含量以92.9%计)。乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

（3）样品：复方丹参片由广州白云山和记黄埔中药有限公司生产，批号：E3A030。

2、检测方法如下：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%三氟乙酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱；检测波长按下表的规定设定，皂苷用蒸发光散射检测器检测；

表1 梯度洗脱表

（2）对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品、丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1mL含600μg丹酚酸B、50μg丹参酮ⅡA的混合溶液，作为混合对照品溶液A；再取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加70%乙醇溶解，制成每1mL含45μg三七皂苷R1、450μg人参皂苷Rg1、40μg人参皂苷Re、200μg人参皂苷Rb1的混合溶液，作为混合对照品溶液B；

（3）供试品溶液的制备：取样品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率400W，频率40KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）对被测溶液的稳定性、色谱柱和仪器的耐用性进行考察，并进行精密度、重复性、专属性、准确度（加样回收率）试验；

（5）测定：分别精密吸取10μL混合对照品溶液A、5μL与15 μL混合对照品溶液B及10μL供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量，用外标两点法对数方程计算三七皂苷的含量。

本发明的有益效果是：

本发明采用液相色谱梯度洗脱、切换检测波长和紫外检测器串联蒸发光散射检测器的检测方法，同时测定了复方丹参片中6种有效成分丹酚酸B、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量，不仅简化了检验过程、节约了分析时间，还为复方丹参片的质量控制提供了较为准确的参考。