[发明专利]预测肿瘤坏死因子抑制剂疗效的试剂和方法

说明书

本发明涉及预测肿瘤坏死因子抑制剂疗效的试剂和方法。具体而言，本发明提供试剂和/或仪器在制备用于预测使用肿瘤坏死因子抑制剂治疗强直性脊柱炎患者疗效的产品中的应用，其中，所述试剂和/或仪器包括用于测定血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平的试剂和/或仪器，其中，所述末端半乳糖基化水平为IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N‑糖链水平Gal0、末端连有1个半乳糖的双天线复杂型N‑糖链水平Gal1和末端连有2个半乳糖的双天线复杂型N‑糖链水平Gal2。

技术领域

本领域涉及预测肿瘤坏死因子抑制剂疗效的试剂和方法。

背景技术

强直性脊柱炎是一种免疫介导的炎症性疾病，以遗传为主，多种感染致病。肿瘤坏死因子(TNF)是在强直性脊柱炎中广泛研究的因子。多个功能性的肿瘤坏死因子(TNF)家族的易感位点都与强直性脊柱炎发病相关，并且其参与多个致病通路。因此，目前肿瘤坏死因子抑制剂被广泛使用用以治疗该疾病。但是经研究发现仍有40％的患者对于该药物没有应答。因此在临床上亟需找到生物标志物来预测肿瘤坏死因子的疗效。

蛋白的糖基化修饰可以反映真实的胞内环境。免疫球蛋白(IgG)在免疫反应中起到重要作用。另外，通过IgG的糖基修饰可以调控免疫细胞的活性。根据文献报导，IgG无半乳糖修饰比例在多种自身免疫性疾病患者中升高。同时，IgG半乳糖化调控了炎症型的免疫紊乱以及破骨细胞的分化与形成。

发明内容

本发明通过结合药物基因组和翻译后修饰(IgG半乳糖修饰)来有效预测肿瘤坏死因子抑制剂的疗效。

具体而言，本发明提供试剂和/或仪器在制备用于预测使用肿瘤坏死因子抑制剂治疗强直性脊柱炎患者疗效的产品中的应用，其中，所述试剂和/或仪器包括用于测定血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平的试剂和/或仪器，其中，所述末端半乳糖基化水平为IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链水平Gal0、末端连有1个半乳糖的双天线复杂型N-糖链水平Gal1和末端连有2个半乳糖的双天线复杂型N-糖链水平Gal2。

在某些实施方案中，所述肿瘤坏死因子抑制剂为融合蛋白类药物。

在某些实施方案中，所述用于测定血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平的试剂和/或仪器包括在以下一种或多种方法中用到的试剂和/或仪器：质谱法，例如基质辅助激光解析飞行时间质谱法、快原子轰击质谱和电喷雾质谱；液相色谱法；液相色谱-质谱联用法；糖芯片技术；和核磁共振NMR。

在某些实施方案中，所述方法为基质辅助激光解析飞行时间质谱法，所述试剂为质量校正标准品TOFmix、2,5-二羟基苯甲酸和乙醇。

在某些实施方案中，所述产品还包括选自下组的一种或多种试剂和/或仪器：

a)用于采集和/或处理对象血液样品的试剂和/或仪器；

b)用于分离和/或纯化血清/血浆IgG的试剂和/或仪器；和

c)用于分离、纯化和/或富集血清IgG表面N-糖链的试剂和/或仪器。

在某些实施方案中，所述用于分离和/或纯化血清/血浆IgG的试剂和/或仪器为在使用下述任一种方法分离IgG时使用到的试剂和仪器：IgG纯化柱、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚乙二醇置换法、液相层析和亲合层析。

在某些实施方案中，所述试剂和/或仪器为使用IgG纯化柱分离样品中的IgG时使用到的试剂和仪器，其中，仪器为蛋白A纯化柱，试剂包括与纯化柱配套的弱碱性结合缓冲溶液和弱酸性淋洗缓冲溶液。

在某些实施方案中，所述用于分离、纯化和/或富集血清IgG表面N-糖链的试剂和/或仪器为采用酶法和化学法从IgG上分离N糖链时使用到的试剂和仪器。

在某些实施方案中，酶法中使用到的试剂包括糖苷酶，优选糖苷酶PNGase F。