[发明专利]一种双链siRNA在制备恶性肿瘤的药物中的应用

说明书

本发明提供了一种双链siRNA在制备恶性肿瘤的药物中的应用。针对新核仁蛋白Rsl1d1的核苷酸序列设计合成siRNA，利用该分子干扰治疗靶点的表达，从而影响其功能，然后给肿瘤模型施用常用抗肿瘤药物，通过测量肿瘤体积和小鼠体重的变化，发现siRNA转入HCT116结直肠癌细胞及其实体瘤后能显著抑制其生长。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种双链siRNA在制备恶性肿瘤的药物中的应用。

背景技术

核仁是细胞核内合成核糖体RNA和组装核糖体的重要场所（Tan BC, et al.Epigeneitc silencing of ribosomal RNA genes by Mybbp1a. J Biomed Sci. 2012;19: 57）。最近发现，核仁是一个高度复杂的多功能核内区域[Pederson T. Theplurifunctional nucleolus. Nucleic Acids Res. 1998; 26: 3871-6.]。核仁的结构蛋白如nucleophosmin和nucleostemin以及核糖体蛋白如RPL6和RPL11等，具有促进肿瘤发生、调节细胞增殖和凋亡的功能，是潜在的肿瘤治疗靶点。

Rsl1d1 （Ribosomal L1 domain-containing protein 1) 是新发现的一种核仁蛋白，该蛋白由细胞衰老抑制基因（CSIG）编码（郭淑贞等.衰老相关新基因CSIG的cDNA 克隆和功能.中国生物化学与分子生物学报.2003: 612-7），通过抑制PTEN的翻译延缓复制性衰老进程（Ma L, et al. CSIG inhibits PTEN translation in replicativesenescence. Mol Cell Biol. 2008; 28: 6290-301）。最近发现，Rsl1d1是促进肿瘤细胞增殖的重要因素（Cheng Q, et al. CSIG promotes hepatocellular carcinomaproliferation by activating c-MYC expression. Oncotarget. 2015; 6: 4733-44）。我们最近发现（数据未发表），Rsl1d1沉默使肿瘤细胞发生凋亡。因此，Rsl1d1是一个潜在的肿瘤治疗靶点。

发明内容

本发明的目的是提供一种双链siRNA在制备恶性肿瘤的药物中的应用。

本发明以Rsl1d1为靶标，设计其特异性双链siRNA分子，并以PEI为载体，通过瘤内注射给药高效抑制肿瘤的生长，从而达到治疗肿瘤的目的。

本发明的技术方案：

本发明公开了一种双链siRNA分子，所述siRNA是靶向Rsl1d1 mRNA的siRNA，其双链核苷酸序列如下：

正义链：5’-CGAAGGAUGAACCCAAUUCAAdTdT-3’

反义链：5’-UUGAAUUGGGUUCAUCCUUCGdTdT-3’

本发明还公开了上述的双链siRNA分子在制备恶性肿瘤的药物中的应用。

所述恶性肿瘤包括结直肠癌。

具体步骤如下：

1.合成Rsl1d1 siRNA（siRsl1d1）。

根据siRNA的设计原则和Rsl1d1基因编码区的核苷酸序列，寻找长度为21 nt的候选区域，选择GC含量为40-50%的siRNA序列，并用Blast进行比对，以确保没有同源性。最终选择靶序列为CGAAGGATGAACCCAATTCAA（SEQ ID No:1），对应编码区296-316核苷酸位点。合成的siRsl1d1序列如下：

正义链：5’-CGAAGGAUGAACCCAAUUCAAdTdT-3’（SEQ ID No:2）