[发明专利]一种活性环八肽Reniochalistatin E及其类似物的合成方法

权利要求书

1.一种活性环八肽Reniochalistatin E的合成方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将Fmoc-Pro-OH连接到已经活化好的2-氯三苯甲基氯树脂上，得到带Fmoc保护基的脯氨酸-树脂复合物Fmoc-Pro-resin；

(2)树脂封闭：用甲醇和DIEA把2-氯三苯甲基氯树脂上残余的反应位点封闭；

(3)将步骤(2)的Fmoc-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Ile-OH进行连接，得到Fmoc保护基的二肽-树脂复合物Fmoc-Ile-Pro-resin；

(4)将步骤(3)的Fmoc-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Pro-OH进行连接，得到Fmoc保护基的三肽-树脂复合物Fmoc-Pro-Ile-Pro-resin；

(5)将步骤(4)的Fmoc-Pro-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Ile-OH进行连接，得到Fmoc保护基的四肽-树脂复合物Fmoc-Ile-Pro-Ile-Pro-resin；

(6)将步骤(5)的Fmoc-Ile-Pro-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Val-OH进行连接，得到Fmoc保护基的五肽-树脂复合物Fmoc-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin；

(7)将步骤(6)的Fmoc-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Pro-OH进行连接，得到Fmoc保护基的六肽-树脂复合物Fmoc-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin；

(8)将步骤(7)的Fmoc-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Trp(Boc)-OH进行连接，得到Fmoc保护基的七肽-树脂复合物Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin；

(9)将步骤(8)的Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin作脱除Fmoc的处理，与经缩合试剂活化过的Fmoc-Leu-OH进行连接，得到Fmoc保护基的八肽-树脂复合物Fmoc-Leu-Trp(Boc)-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin；

(10)将步骤(9)的Fmoc-Leu-Trp(Boc)-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-resin先作脱除Fmoc的处理后，再用2％的TFA/DCM溶液切断树脂，获得色氨酸吲哚上带Boc保护基的线性八肽NH₂-Leu-Trp(Boc)-Pro-Val-Ile-Pro-Ile-Pro-OH；

(11)环合线性肽：将步骤(10)的色氨酸吲哚上带Boc保护基的线性八肽溶于二氯甲烷中，氮气保护下，再向其中加入环合试剂PyBOP，用DIEA调节pH至7～8，室温下搅拌反应，反应24～48小时，减压蒸除溶剂，得到色氨酸吲哚上带Boc保护基的环八肽；

(12)脱除Boc的保护：将步骤(11)的环八肽在体积分数为50％的TFA/DCM溶液处理后，经分离纯化获得最终产物环八肽Reniochalistatin E；

所述的环八肽Reniochalistatin E，其化学名称为：环(脯氨酰-异亮氨酰-脯氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-脯氨酰-色氨酰-亮氨酰)；英文缩写表达式为：cyclo-(Pro-Ile-Pro-Ile-Val-Pro-Trp-Leu)，分子式为C₄₉H₇₃N₉O₈，结构式如下所示：

步骤(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)中所述的缩合试剂为3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮和二异丙基乙胺；所述的3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮和二异丙基乙胺的摩尔比为1：1；

步骤(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)中所述的经缩合试剂活化过的是指在缩合试剂DEPBT和DIEA的存在下相应的待活化氨基酸进行活化，其具体操作步骤为：将芴甲氧羰酰基保护的待活化氨基酸和DEPBT溶于N,N-二甲基甲酰胺，再加入DIEA，室温下活化3～5min；

步骤(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)中所述的连接的条件为氮气环境下摇床反应3～5小时。