[发明专利]一种含有阻拒层的金属螯合亲和层析介质

说明书

本案涉及一种含有阻拒层的金属螯合亲和层析介质，以大孔二氧化硅微球为内核，在微球的孔道内填充有由海藻酸钠、壳寡糖、氮化硅三种组分构成的混合物，在内核表面键合环氧氯丙烷，环氧氯丙烷连接配基，配基络合金属离子；同时在内核表面粘附直链淀粉形成阻拒层，环氧氯丙烷与直链淀粉的质量比为1∶4～5；本发明通过阻拒层实现了对非特异性大分子的阻隔，减少了非特异性吸附，提高了对目标小分子多肽的吸附分离效率。

技术领域

本发明涉及一种层析介质，具体涉及一种含有阻拒层的金属螯合亲和层析介质。

背景技术

近年来，生物技术不断进步，快速有效的从复杂天然混合物中分离、提纯多肽逐渐成为开发新型药物的关键与难点。因此，是否能够对多肽进行高效稳定的分离纯化，成为了多肽研究与应用的前提和基础。随着层析技术的迅速发展，固定化金属螯合亲和层析作为高效的分离技术，可以应用于多肽的分离纯化。

固定化金属螯合亲和层析是一种基于金属离子与氨基酸残基配位作用实现分离的技术，由于具有分离速度快，操作简单等诸多优点，自提出以来便成为分离纯化蛋白的强有力方法，被广泛应用于蛋白质、核酸、多肽等的分离纯化中。然而，实际应用中，当需要从混合体系中分离多肽等目标小分子时，由于存在大分子非特异性吸附的影响，导致目标小分子的吸附位点减少，从而降低对目标小分子的吸附性能。因此需要对亲和层析介质进行一定的修饰改性，以便达到阻拒大分子，降低大分子的非特异性吸附，提高目标小分子的吸附。现有技术中通过在亲和介质基质表面枝接亲水性物质聚乙二醇(PEG)，以形成半渗透保护屏障对大分子杂蛋白进行体积排阻，从而提高对小分子多肽的分离纯化效率，但是该方法需要提前将PEG的端羟基转化为醛基、羧基、卤素、氨基等活性基团才能枝接其于基质，工艺繁琐，而且在含有大分子杂蛋白的体系中对目标小分子多肽的特异性分离效果不甚理想。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种含有阻拒层的金属螯合亲和层析介质。

本发明的技术方案概述如下：

以大孔二氧化硅微球为内核，在大孔二氧化硅微球的孔道内填充有由海藻酸钠、壳寡糖、氮化硅三种组分构成的混合物，在内核表面键合环氧氯丙烷，环氧氯丙烷连接配基，配基络合金属离子，同时内核表面粘附有直链淀粉形成阻拒层，其中，所述环氧氯丙烷与直链淀粉的质量比为1∶4～5。

优选的是，所述混合物中海藻酸钠、壳寡糖、氮化硅的质量分数分别为：

海藻酸钠 50～55wt％；

壳寡糖 40～45wt％；

氮化硅 3～5wt％。

优选的是，所述大孔二氧化硅与复合物的质量比为1∶4～5。

优选的是，所述直链淀粉的聚合度为900～1000。

优选的是，所述大孔二氧化硅微球的粒径在50～100μm，孔道内径大于50nm。

优选的是，所述配基为亚氨基二乙酸、三羟甲基乙二胺、次氨基三乙酸中的一种。

优选的是，所述金属离子为Ni²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Co²⁺中的一种。

本发明的有益效果是：本案选用孔径大于50nm的大孔二氧化硅微球作为内核，具有较大的内表面积和孔隙比，可以较多吸附填充海藻酸钠等混合物；海藻酸钠对二氧化硅具有很好的粘结吸附作用，可以增加混合物对二氧化硅的粘结强度，使内核结构紧密坚实；壳寡糖富含氨基、羟基等活性基团，为键合直链淀粉或者环氧氯丙烷提供连接基团；氮化硅硬度大，能够有效增强亲和层析介质的机械性能和耐压性能。