[发明专利]一种检测ALL相关基因群的检测试剂盒

说明书

本发明公开了一组用来筛查ALL相关基因突变的测序试剂盒以及后续的医学解读数据库。ALL相关基因群包括FAT1，KRAS等16个基因。测序试剂盒包括对ALL相关16个基因全部外显子进行扩增的多重PCR引物。本发明提供的筛查ALL基因突变的试剂盒具有检测效率高、突变基因覆盖面广、检出率高等优点；给出的医学解读报告具有准确、权威的特点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，进一步涉及筛查ALL相关基因突变的检测试剂盒及其医学解读数据库，具体涉及一种检测ALL相关基因群的检测试剂盒。

背景技术

ALL(acute lymphoblastic leukemia即急性淋巴细胞白血病)是一种起源于单个B或T淋巴细胞前体细胞的恶性肿瘤。骨髓内原始细胞的增殖和聚积导致正常造血受抑，从而发生贫血、血小板减少和中性粒细胞减少。ALL可根据免疫学、细胞遗传学和分子遗传学分为多种亚型。ALL的年发生率约是每10万人中有1.6人，男性比女性略多，占所有白血病比例接近12％。该病最常见于儿童，但是任何年龄均可发生。目前导致ALL的确切发病机制尚未明确，但一般认为遗传、辐射、化学物质(如苯)、药物及其他职业上的暴露(如浓烟、颜料、杀虫剂等)可能与ALL的发生有关。

目前检测ALL的方法主要涉及细胞形态、流式细胞学、细胞遗传学、分子生物学。其中分子生物学的实验方法主要有巢式PCR、一代测序等。PCR方法不能直观的得到具体的突变序列，而一代测序的方法受到测序通量的影响，无法一次性检测多个基因的全部外显子区域。而二代测序作为一种高通量的检测方法，可以一次性准确测量多个基因的外显子序列，使精准治疗成为可能。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种检测ALL相关基因群的检测试剂盒，以解决现有技术中ALL的诊断方法较为局限，缺乏从分子生物学的角度诊断ALL的依据的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术的ALL诊断方法准确性较低。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测ALL相关基因群的检测试剂盒，该试剂盒包括以下16个基因： ASXL1，CREBBP，EP300，FAT1，FBXW7，FLT3，JAK1，JAK2，JAK3，KRAS， NOTCH1，NRAS，PTPN11，RUNX1，TET2，TP53。

上述16个基因由121个热点突变组成，其突变位点为本领域常规的突变位点，较佳地包括了indel突变位点(插入或缺失引起的序列改变insertion or deletion， indel)、无义突变位点、拼接区突变位点或错义突变位点，更佳地本发明所述的 16个基因外显子区域的热点突变如表1所示。

表1热点突变列表

本发明所述的16个基因外显子区域的热点突变可用于对ALL做出辅助诊断，本领域ALL常规的诊断方法有形态学、细胞遗传学和流式细胞学，本发明所述方法较佳地从分子生物学角度对ALL做出诊断。

本发明提供一组检测本发明所述ALL相关基因外显子区域的多重PCR引物，所述引物的扩增范围包括16个与ALL相关基因的外显子区域，扩增得到的单个片段长度为250bp左右。利用本发明提供的多重PCR引物，结合二代测序技术，能够检测本发明所述突变基因群中的全部外显子区域。

其中所述的二代测序试剂为本领域常规使用的试剂，只要能够满足对所得序列进行二代测序的要求即可。所述试剂制备方法为本领域常规制备方法，较佳地为市售可得。

本发明所述检测试剂盒更佳地还包括将检测对象中提取的基因组DNA制成可供测序使用的文库的试剂，该种试剂为本领域常规使用试剂，只要能够满足多重PCR对基因组DNA质量的要求即可。所述试剂制备方法为本领域常规制备方法，较佳地为市售可得。