[发明专利]一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法

说明书

本发明公开了一种改良分枝杆菌荧光染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H₂O₂溶液或H₅IO₆溶液，所述初染液采用香豆素溶液。本发明经氧化液氧化后染色，保存时间长，染出的片子颜色鲜艳，对比度高，且无毒无害。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法。

背景技术

结核分枝杆菌是结核病患者存在的一种病菌，查找抗酸染色阳性结核分枝杆菌仍然是诊断结核病有效和准确的重要方法之一。十九世纪八十年代Ziehi与Neelsen共同发明了分枝杆菌抗酸染色法，在以后的一百多年来国内来诸多学者对该方法进行了诸多改良，其中以荧光萋-尼氏抗酸染色法敏感性好，具有对比度好、敏感性好、阳性率高的优势，无疑是临床最佳的染色方法。但这种染色法存在严重的缺陷：

1、染色液中金胺O的高毒性及强致癌性，限制了其推广；

2、染色液中荧光极易衰减且不能保存涂片，染片后必须立即观察，否则造成假阴性结果或各临床单位结论不一致；

3、这种染色液需要避光保存，见光及反复打开都极易导致染色液失效，不利于染色液商品化提供和临床染色方法标准化，故一直未能很好的推广。

发明内容

本发明针对上述技术问题，目的在于提供一种改良分枝杆菌荧光染色液及染色法，经氧化液氧化后染色，保存时间长，染出的片子颜色鲜艳，对比度高，且无毒无害。

本发明通过下述技术方案实现：

一种改良分枝杆菌荧光染色液，所述染色液由氧化液、初染液、脱色液和复染液组成；所述氧化液采用H₂O₂溶液或H₅IO₆溶液，所述初染液采用香豆素溶液。

优选地，所述H₂O₂溶液为：质量百分含量为3％～10％的H₂O₂水溶液。

优选地，所述H₅IO₆溶液为质量百分含量为5％～20％的H₅IO₆水溶液。

优选地，所述初染液的组成为：7-氨基-4甲基香豆素、乙醇、蒸馏水和渗透剂，所述渗透剂采用高分子量嵌段共聚物溶液。

优选地，所述高分子量嵌段共聚物溶液包括DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180。

优选地，所述初染液组成配比为：7-氨基-4甲基香豆素2.0g～5.0g，乙醇200～400mL，蒸馏水600～800mL，DISPERBYK-2200或DISPERBYK-180 20～100mL。

优选地，所述脱色液采用3％～5％的盐酸乙醇溶液。

优选地，所述复染液组成为：橙黄G 3.0～6.0g、乙醇200～400mL、蒸馏水600～800mL、KOH 0.05～0.20g。

基于上述改良分枝杆菌荧光染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，涂片经火焰固定，切片脱蜡至水；

步骤2，滴加氧化液盖满玻片，氧化后倾去氧化液；

步骤3，滴加初染液盖满玻片，染色；

步骤4，水洗并沥干水分；

步骤5，滴加脱色液，轻轻摇动玻片，脱色，然后水洗；水洗后可见残余红色，再滴加脱色液，摇动玻片直至涂片无红色脱出或略呈粉红色为止，水洗；