[发明专利]一种三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖的方法

说明书

一种三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖的方法，采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs，以流式细胞仪检测细胞表面标志；采用四甲基偶氨唑盐（MTT）法观察PNS对MSCs的增殖影响；采用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化；采用相差显微镜、免疫组化及逆转录含酶链反应（RTPCR）鉴定心肌细胞。

技术领域

本发明涉及一种三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖的方法，具体地说是以一种三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖的方法。

背景技术

目前公知的心肌梗死后，如何促进心肌细胞的再生是心血管病学家面临的一个难题。人们一直试图寻找一种细胞移植材料以修复坏死心肌、改善心脏功能。近年来，干细胞的研究为人们提供了新的希望。骨髓间质干细胞（mesemchymal stem cells, MSCs）是骨髓中除造血干细胞以外的另一类干细胞，具有向成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等分化的能力，并且在体外易于分离培养和扩增，这些特性使MSCs成为在细胞治疗中有效发挥作用的理想细胞。目前国内外多用5氮胞苷（5azacytidine，5aza）来诱导MSCs分化为心肌细胞。

发明内容

研究对象：材料；实验动物 纯种7周龄 SD大鼠，SPF级，雌雄不限，体质量190g，由广州中医药大学动物实验中心提供，合格证号：0004979。主要试剂与仪器IMDM（Iscovesmodified Dulberccos medium）培养基购于Gibco公司；特级胎牛血清(FBS)购于Hyclone公司；5氮胞苷购于Sigma公司；PNS（批号：0870-200303）购于广州市药检所（纯度99％）；Percoll梯度分离液购于Pharmacia 公司；荧光标记抗大鼠抗体CD34FITC、 CD44FITC和小鼠抗人结蛋白抗体（Desmin）单抗、小鼠抗人肌钙蛋白I（cTnI）单抗购于Santa Cruz公司；链霉亲含素-生物素复合物（SABC）试剂盒及二氨基联苯胺（DAB）显色剂购于武汉博士德公司；Trizol为Gibco公司产品；聚合酶链反应（PCR）引物由上海申能博彩生物科技有限公司合成；Access RTPCR试剂盒为Promega公司产品；倒置显微镜（日本，OLYMPUS）；CO2培养箱（美国力高公司）；流式细胞仪（美国BECKMAN COULTER）；PCR基因扩增仪（美国PE9600）。