[发明专利]一种腐皮镰刀菌及其发酵生产右旋糖酐酶的方法

说明书

本发明属于微生物应用技术领域，尤其涉及一种腐皮镰刀菌及其发酵生产右旋糖酐酶的方法。一种腐皮镰刀菌，其特征在于，其分类命名为腐皮镰刀菌Fusarium solani DJ72，保藏编号CGMCC No.14542，保藏日为2017年07月27日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明首次提供了一种高产右旋糖酐酶的新菌株‑腐皮镰刀菌Fusarium solani DJ72，该菌株可用于发酵生产右旋糖酐酶，并且其发酵液酶活力达到124.3U/ml。

技术领域

本发明属于微生物应用技术领域，尤其涉及一种腐皮镰刀菌及其发酵生产右旋糖酐酶的方法。

背景技术

右旋糖酐酶是一种能够催化断裂右旋糖酐中α-1,6-糖苷键的水解酶，在医药行业、制糖业中都具有重要作用。在医药行业中，右旋糖酐酶能够水解高分子右旋糖酐生产替代血浆的小分子右旋糖酐；在制糖业中，右旋糖酐酶能够降低糖黏度，提高糖回收率。

目前已报道的右旋糖酐酶产生菌有很多，包括真菌、细菌等，其中青霉菌株居多，真菌所产右旋糖酐酶大多稳定性好，酶活力高，具有很高的研究价值。

本发明提供一种生产右旋糖酐的腐皮镰刀菌(Fusarium solani)，腐皮镰刀菌在工业应用上主要有大黄素生产等，尚未有生产右旋糖酐酶的相关报道。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明第一个目的是提供一种右旋糖酐酶生产菌株DJ72，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码：100101)，保藏号为CGMCC No.14542，保藏时间为：2017年07月27日，分类命名为腐皮镰刀菌Fusarium solani。

该菌株是从糖厂排污口土壤中，经平板培养基初筛、摇瓶复筛，经酶活力检测后得到。

右旋糖酐酶活力的检测采用3，5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylate,DNS)法：在最适pH、最适温度下，经适当稀释后的酶液与1％(w/v)右旋糖酐T70反应10min，加入DNS终止反应。每分钟水解产生1μmol还原糖量所需酶量定义为一个单位酶活力单位。

本发明的第二个目的是提供利用腐皮镰刀菌Fusarium solani DJ72菌株生产右旋糖酐酶的方法，该方法为：发酵腐皮镰刀菌Fusarium solani DJ72菌株，然后收集发酵产物，即得到右旋糖酐酶。

本发明还提供了腐皮镰刀菌Fusarium solani DJ72菌株发酵生产有右旋糖酐酶的方法，包括如下步骤：

(1)菌株的平板筛选培养基培养：接种菌株至平板培养基上，28-37℃下静置培养2-4天；

(2)种子培养：从平板筛选培养基上转接菌株至液体种子培养基中，28-37℃，150-200rpm震荡培养2-3天；

(3)发酵产酶：将步骤2培养所得种子以1-3％的体积比接种到发酵培养基中，28-37℃，震荡培养4-7天后检测发酵液酶活力。

作为优选，所述的平板筛选培养基配方(g/L)：酵母粉10；蛋白胨5；K₂HPO₄ 2.5；MgSO₄ 2.5；右旋糖酐T500 10；琼脂粉15-20；pH 5.5-6.0。

作为优选，所述的液体种子培养基配方(g/L)：酵母粉5；蛋白胨5；K₂HPO₄ 1；MgSO₄1；右旋糖酐T500 10；FeSO₄ 0.01；KCl 0.5；pH 5.5-6.0。