[发明专利]一种吡虫啉半抗原、完全抗原及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种吡虫啉半抗原、完全抗原及制备方法和应用，所述吡虫啉半抗原以6‑甲基烟酸为原料，先与甲醇反应生成6‑甲基烟酸甲酯，6‑甲基烟酸甲酯与N‑溴代琥珀酰亚胺反应得到6‑（溴甲基）烟酸甲酯，再与N‑（咪唑烷‑2‑亚基）硝酰胺反应生成6‑（（2‑（硝基亚氨基）咪唑烷‑1‑基）甲基）烟酸甲酯，最后用NaOH水溶液将酯反应成6‑（（2‑（硝基亚氨基）咪唑烷‑1‑基）甲基）烟酸，即为吡虫啉半抗原。将吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联，制备得到吡虫啉完全抗原。免疫动物实验表明本发明制备的人工抗原具有良好免疫原性，本发明的吡虫啉半抗原和吡虫啉抗原可用于吡虫啉免疫分析检测，应用前景十分广阔。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种吡虫啉半抗原、完全抗原及制备方法和应用。

技术背景

吡虫啉是一种含吡啶环的超高效内吸性杀虫剂，对缨翅目、鞘翅目、同翅目、鳞翅目及双翅目等，尤其是对刺吸式口器害虫如中国梨木虱、桃蚜、小绿叶蝉、苹果瘤蚜、蓟马、黑尾叶蝉、梨黄粉蚜、白粉虱、梨象甲等具有高残效和内吸性，能广泛用于小麦、蔬菜、水稻、棉花等大多数农作物，具有高效、低毒、广谱强的特点。虽然吡虫啉效果显著，使用后虫害能够得到有效控制，但该农药的残留长，会对人、畜构成威胁，给农产品、食品的销售及安全出口带来影响。我国食品安全国家标准GB2763-2016《食品中农药最大残留限量》中规定蔬菜大白菜中吡虫啉的最大残留限量为0.2mg/kg，水果苹果、梨中吡虫啉的最大残留量为0.5mg/kg。

现有的吡虫啉检测主要是液质联用及酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。ELISA方法简单、有效、适合现场快速、高能量测定，越来越多地被相关检疫检测单位所应用。建立小分子的ELISA检测方法，其首要条件是进行半抗原和抗原的制备。优秀的半抗原、抗原可以激发被免疫动物产生灵敏度高、特异性好的抗体。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种吡虫啉半抗原以及吡虫啉完全抗原，可有效地刺激被免疫动物产生灵敏度高、特异性强的抗体。

本发明的另一个目的在于提供上述吡虫啉半抗原以及吡虫啉完全抗原的制备方法，该方法简单易行。

本发明制备得到的吡虫啉半抗原和吡虫啉完全抗原可用于后续吡虫啉的免疫分析方法建立，应用于食品中吡虫啉的检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种吡虫啉半抗原，其分子结构为：

一种吡虫啉完全抗原，其分子结构为：

所述吡虫啉半抗原的制备方法，包括以下步骤为：

1)将1份6-甲基烟酸溶解在3-4份甲醇中，加入0.1-0.2份浓硫酸，反应体系65-70℃加热回流3～4小时，减压蒸馏除去甲醇，得白色固体粉末，该粉末为6-甲基烟酸甲脂；

2)将1份上述6-甲基烟酸甲脂溶于3-4份四氯化碳中，接着加入1.2-1.5份N-溴代琥珀酰亚胺，待反应体系升温到80℃，加入0.1-0.2份偶氮二异丁腈或过氧苯甲酰，反应体系70-80℃反应3～4小时，减压蒸馏除去四氯化碳得褐色液体，该褐色液体用柱色谱纯化得白色固体，该白色固体为6-(溴甲基)烟酸甲酯；

3)将1份上述6-(溴甲基)烟酸甲酯溶于3.5-4份乙腈中，加入1-1.2份N-(咪唑烷-2-亚基)硝酰胺和3-3.5份碳酸钾，反应体系70-80℃反应5-6小时后冷却并抽滤，滤液浓缩后用柱色谱分离纯化得白色固体，该白色固体为6-((2-(硝基亚氨基)咪唑烷-1-基)甲基)烟酸甲酯；