[发明专利]以蛋黄极性脂质为基础制备的纳米药物载体

说明书

技术领域

本发明属肿瘤临床诊断、治疗领域，具体涉及一种能用于肿瘤诊断及靶向治 疗的脂质纳米载体，本发明还涉及该载体在药物递送方面的应用。

背景技术

肿瘤成为当今社会威胁人类生命健康的头号杀手，每年约1400万人受累， 寻求新的靶向治疗手段仍是目前肿瘤治疗中亟待解决的关键问题。随着纳米科技 的进步，纳米材料介导的肿瘤靶向治疗手段也受到了广泛的关注，它不仅可增加 药物的溶解性，降低药物的清除率，最重要的是可减少化疗药物本身对正常组织 器官的毒副作用。目前，从无机的金、银、二氧化硅、介孔氧化钽等纳米载体到 有机的DOTAP/DOPE、PEG等，越来越多的纳米材料应用到了生物医药领域， 但化学合成纳米材料本身对机体的毒性进一步限制了纳米载体的临床应用。

发明内容

本发明的目的在于：1、提供一种负载肿瘤化疗药物、小分子核酸的新型天 然脂质来源的纳米载体EYLNs；

2、提供上述纳米载体在肿瘤化疗药物、小分子核酸、荧光染料等负载方面的应 用；3、提供制备上述纳米载体的制备方法。

本发明的技术解决方案是该纳米药物载体的制备方法包括以下步骤：

(1)蛋黄极性脂质提取：脂质提取采用极性脂质提取试剂盒(Lipid Extraction and Polar/Neutral Lipid Separation Combo Kit,CELL BIOLABS,INC. Lot:12520164)提取，提取脂质经氮气吹干后备用；

(2)纳米药物载体制备：于干燥后的脂质(含200nmol磷脂的脂质)玻璃 安剖瓶中加入400μL的双蒸水，然后置于水浴超声中超声60min至透亮，每 10min暂停5min，再将其通过200nm孔径的滤膜反复滤过后备用；取上述新 鲜制备的EYLNs载体溶于约500μL的双蒸水中，然后将其置于检测样品池中， 通过Nicomp380Z3000粒度分析仪分析载体的粒径及Zeta Potential分布情况。

其中，以该纳米载体为核心，制备负载其它诊断制剂的载体体系。

其中，以该纳米载体为核心，制备负载其它治疗性制剂的载体体系。

其中，所述载体在肿瘤诊断试剂开发中的应用。

其中，所述的载体在肿瘤治疗中的应用。

本发明的优点是：通过蛋黄脂质制备获得了一种新的“绿色”纳米载体 EYLNs(Egg yolk lipids derived nanovectors，EYLNs)，前期数据证实该载体制备 工艺简单、成本低廉、对机体的毒副作用小，且可高效负载化疗药物、小分子核 酸药物及荧光染料等，是一种具有巨大潜在应用价值的新型纳米药物载体。

附图说明

图1是蛋黄极性脂质纳米载体及载体粒径、表面电势分析；将水浴超声制备 的纳米载体进行拍照，并行粒度仪检测发现其粒径约200nm，表面电势约-45mV， 较为稳定。

图2是载体体外毒性分析。

图3是携带化疗药物及核酸制剂的载体及分析图。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案，但实施例不能理解为是对技 术方案的限制。

实施例：依以下步骤制备纳米药物载体

(1)蛋黄极性脂质提取：脂质提取采用极性脂质提取试剂盒(Lipid Extraction and Polar/Neutral Lipid Separation Combo Kit,CELL BIOLABS,INC. Lot:12520164)提取，提取脂质经氮气吹干后备用；

(2)纳米脂质载体制备：于干燥后的脂质(含200nmol磷脂的脂质)玻璃 安剖瓶中加入400μL的双蒸水，然后置于水浴超声中超声约60min(每10min 暂停5min)至透亮，再将其通过200nm孔径的滤膜反复滤过后备用；取新鲜制 备的EYLNs载体溶于约500μL的双蒸水中，然后将其置于检测样品池中，通过 Nicomp380 Z3000粒度分析仪分析载体的粒径及Zeta Potential分布情况。

载体EYLNs体外细胞毒性分析：将不同浓度的EYLNs(5、10、20μg/ml)与体 外培养的肿瘤细胞如人结肠癌细胞HCT116、食管癌细胞Eca109及白血病细胞 Molt4等孵育不同时间，通过实时无标记检测技术检测其对细胞增殖能力的影响， 同时通过流式细胞术利用ANNEXIN V/PI凋亡检测试剂盒检测其对细胞凋亡的检 测。