[发明专利]一种甲状腺球蛋白的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种甲状腺球蛋白的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲状腺球蛋白（TG）是一种存在于甲状腺滤泡细胞中的大分子糖蛋白（MW 660,000）。每个TG约含2个甲状腺素(T4) 和0.5个三碘甲状腺素原氨酸(T3)，这2种激素是由TG分子内一些酪氨酸的碘化和耦合作用而产生。TG的主要生理作用是作为甲状腺激素合成的基质、存储碘离子和运输释放甲状腺激素。TG对甲状腺细胞有多种作用，一方面，在低浓度下可促进甲状腺滤泡上皮细胞的增殖，而在高浓度下可抑制甲状腺细胞生长；另一方面，TG在高浓度下还可拮抗促甲状腺激素的作用，抑制甲状细胞表达甲状腺特异转录基因。当甲状腺受到刺激时，甲状腺球蛋白将会降解，此时甲状腺激素、T3和T4就会释放到血液中，同时少量的TG也释放入血，部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。

TG是甲状腺组织特异性蛋白，除由正常甲状腺滤泡细胞分泌外，分化型甲状腺癌（Differentiated thyroid carcinoma，DTC）细胞也会不同程度的分泌。甲状腺球蛋白(TG) 是分化型甲状腺癌(DTC) 的标志物。定期随访血清TG有助于对DTC复发和转移的诊断、评价，以及监测病人预后的治疗效果。甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲状腺疾病都可出现血中TG水平升高。因此，甲状腺球蛋白也被认为是甲状腺体形态完整性的特殊标志物。

目前用于检测甲状腺球蛋白的方法主要有胶体金免疫分析法、酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法等。其中CN 106932573A（2017.07）公开了检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条及其制备方法，该方法采用胶体金标记甲状腺球蛋白抗体，胶体金方法的检测是以肉眼可见的颜色进行表征，存在误差较大，操作繁琐、流程较多、灵敏度低、精度不高等缺点；CN 106706927 A（2017.05）公开了一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒，该试剂盒采用酶联免疫方法进行检测，酶联免疫分析法抗原、抗体是在固相（ELISA板反应孔）表面进行结合反应，存在灵敏度低、不易实现全自动化、检测时间长等的缺点；CN 105510593 A（2016.04）公开了一种甲状腺球蛋白（TG）测试试剂盒及其检测方法，该试剂盒采用碱性磷酸酶作为标记物，采用碱性磷酸酶进行标记的缺点是酶促受环境影响大：如消毒液、酸碱度、离子都会对其造成影响，稳定性较弱，从而影响测定结果。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测甲状腺球蛋白的方法具有十分重要的意义。

本发明以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术进行检测。

吖啶取代物作为化学发光标记物用于免疫分析具有许多优越性，主要有：①化学反应简单、快速、无需催化剂，在有H₂O₂的稀碱性溶液中即能发光；②背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；③发光类型为闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度；⑤易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑥标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

磁分离免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体而建立的一种新型免疫检测方法，该方法可使抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简便、灵敏度更高、反应快速、稳定、准确地定量测定甲状腺球蛋白的磁微粒化学发光测定试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

一种甲状腺球蛋白的化学发光试剂盒及其制备方法，本发明所提供的甲状腺球蛋白的化学发光试剂盒，采用磁微粒偶联甲状腺球蛋白捕获抗体、吖啶酯标记的甲状腺球蛋白检测抗体。试剂盒还包括甲状腺球蛋白校准品溶液、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述磁微粒的内核为四氧化三铁或三氧化二铁，磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与甲状腺球蛋白捕获抗体偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记甲状腺球蛋白捕获抗体。