[发明专利]一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种降钙素的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

降钙素（Calcitonin，CT）是一种单肽链激素，其由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌，主要由肾脏代谢。它可降低血浆中钙、磷浓度，抑制钙、磷的吸收，是甲状旁腺激素的拮抗物。其生物活性主要作用的靶器官为骨、肾。通常钙水平的升高和降低标志降钙素的分泌情况，循环中钙水平升高，则降钙素水平也迅速升高。降钙素在人体内的半衰期为25-30h，稳定性好，在正常人血清中含量极低。测定降钙素临床意义主要在于用于恶性肿瘤的疗效观察和判断预后，如甲状腺癌或肺癌手术后，血清降钙素仍持续升高，说明有残余的肿瘤组织形成，预后较差。血降钙素增高可见于多种恶性肿瘤和急、慢性肾功能不全等。降钙素可作为甲状腺髓样癌早期诊断的指标，亦可作为甲状腺髓样癌治疗效果的指标，当治疗有效时降钙素明显下降，故可作治疗效果估计。降钙素升高亦见于肺小细胞癌(燕麦细胞癌)和肿瘤骨转移时血清降钙素水平可有明显升高，还可作为肺癌等恶性肿瘤的活动性指标。乳腺癌也有降钙素升高，尤其在骨转移时。降钙素升高可能是由于内分泌紊乱所致。白血病、肝硬化、血液透析等亦可有降钙素升高。孕妇和儿童因骨骼生长，血清降钙素水平增高，妇女停经以后血清降钙素水平下降。

降钙素增高可见于：孕妇、儿童、甲状旁腺功能亢进、血胃泌素过多、肾衰、慢性炎症、泌尿系感染、急性肺损伤、髓状甲状腺癌、甲状腺降钙素分泌细胞癌、白血病、骨髓外骨髓增殖症、肺癌、食管癌、乳腺癌。降钙素降低可见于甲状腺先天发育不全、甲状腺全切病人、妇女停经以后、低血钙、老年性骨质疏松等。准确测定生理条件和疾病状况下降钙素水平的变化，有助于深入认识降钙素的生物学作用，同时也有助于对临床某些疾病(尤其是甲状腺髓样癌，简称MTC)的早期诊断及其疗效和预后的观察。

到目前为止，用于检测降钙素的方法主要有：免疫比浊法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）以及酶促化学发光法。免疫比浊法是一种抗原抗体结合动态测定方法，虽然免疫比浊法具有操作简单、快速的优点，但其中乳胶增强免疫比浊法反应后会产生沉淀，不利于生化仪的清洗，干扰试验结果，且乳胶制造成本较高，导致免疫比浊试剂盒价格和检测成本偏高，纳米颗粒增强的免疫比浊法也具有灵敏度低、低值重复性差等缺点，故近年来许多本来使用免疫比浊法测定的药物多已改用其他免疫分析方法。CN 104020295 A（2014年9月）公开了一种基于胶体金免疫比浊法的降钙素检测试剂盒，该试剂盒虽然具有制造成本低，反应后不产生沉淀，方便生化仪清洗的优点，但其仍然具有灵敏度、低值重复性差的缺点。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。该方法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求。酶促化学发光法是以酶标记抗原或抗体进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定，目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP)。采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H₂O₂氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易；采用碱性磷酸酶的主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测降钙素的方法具有十分重要的意义。

本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：