[发明专利]一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法

权利要求书

1.一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

外植体的建立：选取生长健壮的当年生北美红杉优良无性系枝条，剪取2～3cm长的带芽茎段作为外植体；

外植体的消毒：将选取的带芽茎段先用无菌水冲洗4～5次，再用70％的酒精浸泡10～20秒，然后浸入装有0.1％的氯化汞溶液的消毒瓶中，并将消毒瓶放在摇床上边摇晃边消毒5～7分钟，取出带芽茎段用无菌水冲洗4～5次，备用；

分化诱导：用镊子将消毒后备用的带芽茎段接种到诱导培养基上，分化诱导25～30天，带芽茎段上诱导出小芽，其中，诱导培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂4.5～5.0g/L+2-巯基苯并噻唑2～3mg/L；

增殖培养：为获得更多整齐一致的种苗，将诱导出的小芽接种在增殖培养基上，增殖培养30～40天后，形成芽的丛生植株，其中，增殖培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+蔗糖35～40g/L+琼脂5.0～6.0g/L；

瓶外生根：待形成的丛生植株长到3～4cm时，将其从培养瓶中取出，洗净根部附着的培养基，并人工或者用修枝剪(提前用75％的酒精消毒备用)分开，于浓度为500ppm的α-奈乙酸中浸泡30分钟，然后轻轻倾斜30°插入经消毒处理的珍珠岩的苗床中，然后在苗床上搭建塑料拱棚，拱棚高度为80厘米，保持基质湿度为85％；

移栽培育：待根系长出2～3条、根长达到2～3厘米时移栽至口径为10㎝的花盆中，花盆中的营养土为经消毒处理的腐殖土，移栽后每7天喷施0.1％的磷酸二氢钾，并加强病虫害管护措施即可；

所述珍珠岩和腐殖土的消毒处理均采用丙环唑/氯化钴配合物，方法为将丙环唑/氯化钴配合物按3wt％～5wt％的比例分别混入珍珠岩和腐殖土中，混合均匀，洒水调节湿度至85～95％，然后盖上塑料薄膜，持续消毒3～5天。

2.根据权利要求1所述的一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于：所述分化诱导于温度20～28℃、光照强度3000～4000Lx、光照时间10～12h/d的条件下进行。

3.根据权利要求2所述的一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于：所述诱导培养基为MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂4.5～5.0g/L+二胺基二硫代甲酸钠2～3mg/L。

4.根据权利要求3所述的一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于：所述丙环唑/氯化钴配合物的制备方法如下：

按2.2:1的物质的量比取丙环唑和六水合氯化钴，然后分别溶于3倍质量倍的无水乙醇中，于80℃的回流温度下将六水合氯化钴溶液逐滴加入丙环唑溶液中，继续回流搅拌2h，冷却，静置过夜，抽滤除去滤液，沉淀用无菌水洗涤4～5次，然后真空干燥，得到蓝色固体，即为丙环唑/氯化钴配合物。

5.根据权利要求4所述的一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于：所述沉淀真空干燥的温度为55～60℃，真空度为0.09MPa～0.1MPa，干燥时间为4h。

6.根据权利要求5所述的一种北美红杉优良种苗的组培快繁方法，其特征在于：所述花盆的内部刷涂有混有氢氧化铜的乳胶漆，花盆的侧壁刷涂成等间距的竖直条状，花盆的底部刷涂网状结构。