[发明专利]一种妊娠相关血浆蛋白A的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种妊娠相关血浆蛋白A的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

妊娠相关血浆蛋白A（Pregnancy-Associated Plasma Protein A，PAPP-A）是1974年从孕妇血清中分离出来的一种大分子糖蛋白化合物，由胎盘合体滋养 层和蜕膜细胞产生。其结构是由2个PAPP-A分子与2个嗜伊红主要碱性蛋白前体（proform of eosinphil major basic protein，proMBP）组成的异构聚合体，相对分子质量为474000。在流产、先兆流产、宫外孕及畸形胎儿的孕妇外周血中PAPP-A的含量均低于同孕周的正常孕妇，早孕阶段低水平的PAPP-A不仅可筛查染色体异常的胎儿，尤其对唐氏综合征胎儿预测有一定意义。

唐氏综合征(Down Syndrome，DS)是常见的严重危害胎儿的出生缺陷疾病。唐氏综合征给家庭和社会带来了沉重的经济负担。由于产前血清标志物筛查具有无创伤性，能最大限度减少羊膜腔穿刺或绒毛膜取样所造成的创伤，因而引起了国内外学者的高度关注。近年来，最受到关注的标志物之一就是妊娠相关血浆蛋白A，妊娠相关血浆蛋白A可作为妊娠唐氏综合征胎儿产前筛查的一个独立的标志物。PAPP-A作为一种无创性产前诊断的新趋势，可用于妇产科临床， 其优点是对胎儿无创，尤其在预测流产、宫外孕及胎儿畸形等方面有较大的价值和意义，对孕期多种合并症进行筛查监护，有效地降低异常新生儿的出生，值得临床推广和研究。

到目前为止，用于检测妊娠相关血浆蛋白A的方法主要有：免疫电泳法、放射免疫法、酶联免疫法（ELISA）以及时间分辨荧光免疫法。火箭免疫电泳、放射火箭免疫电泳是最早应用于检测PAPP-A的方法，但其特异性、灵敏度和重复性都不适宜于作定量分析及大批量标本检测，很快被其它方法取代。放射免疫法虽然特异性和灵敏度作为定量测定的可靠方法已为大家所公认，然而其是一种竞争性免疫分析法，抗原和抗体的性质均决定了检测的特异性，因此需要纯化的PAPP-A作为标准和示踪剂，但PAPP-A的提纯过程是相当复杂的，在提纯或碘处理过程中可引起分子结构改变或因同种异构化合物的存在而影响结果，此外，放免法由于碘标示踪剂存在固有半衰期，造成了试剂的有效期短，而且放免法对设备的要求特殊，使它在一般实验室开展受到限制。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。该方法虽然检测价格低廉、快速，但是酶标法本身受固相反应的制约，酶标显色的稳定性也易受温度和酸碱度变化的影响，所用底物大部分为有毒物质或致癌物，且其灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求。CN1210267A（1999年3月）公开了一种酶联定量检测妊娠相关血浆蛋白A的试剂盒，该试剂盒的主要缺点是其采用了抗PAPP-A/proMBP抗体，是以PAPP-A/proMBP复合物形式存在的血清中分离获得的抗原制备的，而在整个妊娠过程中，血清proMBP的水平大大超过了PAPP-A，使得PAPP-A的测定结果不能真实反映其在血液中的水平，检测准确性降低。而时间分辨荧光免疫法准确性及特异性较高，但速度慢，且设备昂贵，成本相对较高，不易在基层医疗机构推广使用。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测妊娠相关血浆蛋白A的方法具有十分重要的意义。

本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的妊娠相关血浆蛋白A的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种妊娠相关血浆蛋白A的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的磁微粒化学发光方法检测妊娠相关血浆蛋白A的试剂盒，采用磁微粒偶联妊娠相关血浆蛋白A捕获抗体，吖啶酯标记妊娠相关血浆蛋白A检测抗体。试剂盒还包括妊娠相关血浆蛋白A校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。