[发明专利]一种他克莫司的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种他克莫司化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：偶联有抗原或抗体的磁微粒、吖啶酯标记物、他克莫司校准品溶液、清洗液、化学发光预激发液A、化学发光激发液B。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明试剂盒操作简单方便，反应条件温和，发光值稳定，受外界条件影响少；与现有技术相比，具有灵敏度高、检测快速方便、准确性高、重复性好、特异性强等优点。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种他克莫司的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

他克莫司（Tacrolimus，FK506）是一种从霉菌发酵物中提取的23元大环内酯类抗生素，是一种钙调磷酸酶抑制剂。主要用于肝、肾和小肠等脏器移植中，抑制机体的排异反应，具有十分重要的临床实用价值。他克莫司作用机理主要是通过抑制T细胞活化相关细胞因子基因（IL-2、IL-3、IL-4、IL-5）的转录和IL-2、IL-7受体的表达发挥免疫抑制作用，其作为一种新型免疫抑制剂，具有药效强、使用剂量低、移植物存活率高、急性排斥反应发生率低等优点。他克莫司的个体吸收率和清除率差别很大，且用药剂量与血药浓度之间缺乏紧密的相关性。他克莫司浓度过高时易导致毒性产生，过低时易并发急性排斥反应。因此临床使用需要制定合理的用药方案，测定血中他克莫司的浓度来监测其用量对于指导器官移植及自身免疫疾病患者的临床安全合理用药有着重要的意义。

目前用于检测他克莫司的方法主要有高效液相色谱法、放射免疫法、荧光偏振免疫分析法、酶联免疫分析法等。其中，高效液相色谱法可以检测他克莫司原药的浓度而不测定其代谢物的浓度，结果准确可靠，但其样本前处理操作繁琐，耗时，且检测费用高昂，检测样本有限，不宜用于常规的临床检测；放射免疫法操作步骤较多，需要特殊的检测设备，且会对操作人员的健康产生极大的危害；时间分辨荧光免疫分析法速度慢，且设备昂贵，成本相对较高；荧光偏振免疫分析法是基于待测物和联接了荧光的待测物对特定的待测物抗体上有限的受体结合位点的竞争性结合，但其需要特殊的设备，且所需要的试剂主要依赖进口，费用极其昂贵；酶联免疫分析法存在灵敏度低、不易实现全自动化、检测时间长等的缺点。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测他克莫司的方法具有十分重要的意义。

本发明以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术进行检测。

吖啶取代物作为化学发光标记物用于免疫分析具有许多优越性，主要有：①化学反应简单、快速、无需催化剂，在有H₂O₂的稀碱性溶液中即能发光；②背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；③发光类型为闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度；⑤易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑥标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

磁分离免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体而建立的一种新型免疫检测方法，该方法可使抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简便、灵敏度更高、反应快速、稳定、准确地定量测定他克莫司的磁微粒化学发光测定试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

一种他克莫司的化学发光试剂盒及其制备方法，本发明所提供的他克莫司的化学发光试剂盒，包括以下组分：偶联有抗原或抗体的磁微粒、吖啶酯标记的抗原或抗体、他克莫司校准品溶液、清洗液、化学发光预激发液A以及化学发光激发液B。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与他克莫司抗体或抗原偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记他克莫司抗体或抗原。