[发明专利]一种胎儿纤连蛋白的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析领域，具体是一种胎儿纤连蛋白的免疫化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

胎儿纤连蛋白（fetal fbronectin，fFN）是可用于预测早产短期风险的糖蛋白。fFN由位于羊膜囊和母亲子宫内膜（蜕膜）之间接合处的绒毛膜滋养细胞产生。胎儿纤连蛋白在此接合处可大量检出并维持接合处的完整性。妊娠早期即可在宫颈阴道粘液检测到fFN，24周以后则检测不到fFN。但是，在妊娠36周后又可重新检测到fFN。据美国妇产科学会（ACOG）称，正常的孕期为40周，妇女可在怀孕36-42周时分娩。孕期36周以后在宫颈阴道粘液中检测到fFN是正常的，因为fFN通常在准备好分娩时释放。妊娠早期在阴道粘液中升高的fFN反映了子宫胎接合处组织正常的生长和建立。当这一过程结束，fFN水平逐渐降低。孕期22-36周之间不能检测到fFN。此期间fFN水平升高反映子宫胎盘接合处失调，且与早产风险增高相关。

妊娠期间母体和胎儿本身合成一些特异性物质，同时诱发早产的某些因素如生殖道感染时，可刺激母体和胎儿合成一些特异性物质如fFN。当早产发生前，母体发生一些相应的变化，其可能的机制是：引起早产发生的炎症产物和炎症介质通过刺激绒毛产生fFN，其不受前列腺素的调节，并且不依赖花生四烯酸环氧化酶通路；炎症反应过程中，白细胞通过释放前列腺素及蛋白酶在局部发挥作用，破坏蜕膜、绒毛间的细胞外基质界面，加强胎膜的降解，改变宫颈条件，使fFN释放到宫颈、阴道中，从而使宫颈阴道分泌物中fFN含量有所增加；早产有宫缩出现甚至是难以察觉的子宫收缩时，可使蜕膜、绒毛膜分离，导致胎膜和蜕膜轻微损伤释放fFN，同时，羊水中的fFN又可经损伤的胎膜渗漏到羊膜腔外，这些fFN也可经胎膜与子宫蜕膜的间隙进入宫颈和阴道。由此可从宫颈阴道分泌物中检测fFN来预测早产，而且测定宫颈阴道分泌物操作简单、无创伤，使得此项检查更多地为人们所关注。近年人们对宫预阴道分泌物中的fFN预测早产已进行了较多的研究，认为其是预测早产的一个重要指标。

目前胎儿纤连蛋白检测的方法有：胶体金法等。CN 104391121 A（2015年3月）公开了一种胶体金法检测胎儿纤连蛋白的试剂盒，利用胶体金法进行检测的缺点是最后检测结果是以肉眼可见的颜色进行表征，误差较大，并且操作繁琐，流程较多，更易出现误差，灵敏度低。本发明采用吖啶酯标记，具有如下优点：①背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；②闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定，不受环境氧化剂的影响(在2-8℃下可保存数月之久)。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

本发明采用的方法为化学发光法，其优点为：灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、线性范围宽，检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明提供了一种具有较高灵敏度和特异性的检测胎儿纤连蛋白的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种胎儿纤连蛋白的化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的化学发光法检测胎儿纤连蛋白的试剂盒，采取磁微粒偶联胎儿纤连蛋白（fFN）捕获抗体，吖啶酯标记胎儿纤连蛋白（fFN）检测抗体。试剂盒还包括胎儿纤连蛋白校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与胎儿纤连蛋白抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记胎儿纤连蛋白抗体。

作为本发明进一步的方案，所述磁珠的表面修饰基团为羧基、氨基、链霉亲和素-生物素或对甲苯磺酰基。磁珠使用前固相的不完全沉降会影响精确度，因此选择时应选分散性好，沉降速度慢的磁珠。

作为本发明进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如：NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是胎儿纤连蛋白（fFN）检测抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记胎儿纤连蛋白（fFN）检测抗体的缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.20mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯与抗体的摩尔比为5-100:1。