[发明专利]人脂肪干细胞特异性培养基

说明书

本发明提供一种人脂肪干细胞特异性培养基，由高糖型DMEM基础培养基、碱性成纤维细胞生长因子、人表皮细胞生长因子、重组人胰岛素、左旋卡尼丁、还原型谷胱甘肽、细胞增殖促进肽、亚油酸、α‑酮戊二酸组成。该培养基不仅能提供加速的人脂肪干细胞培养时间，同时培养得到人脂肪干细胞均一性较好，并且非常有利于后续的分化。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人脂肪干细胞特异性培养基。

背景技术

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。

研究发现ADSCs细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，适宜自体移植，逐渐成为近年来新的研究热点之一。

传统的脂肪移植手段由于存在免疫排斥、炎症反应等缺陷难以得到让人满意的疗效。据统计，自体脂肪组织移植到缺损部位后，通常其中40％～60％会被吸收。通过患者自身的脂肪组织内的干细胞，来构建具有完整生物学结构和功能工程脂肪组织无疑将是解决这一难题的最佳方案。如何实现从干细胞到脂肪细胞的分化，是构建工程北京丽都脂肪组织不可回避的问题。早在2001年，Zuk等人发现脂肪干细胞以来，就已经证明脂肪干细胞具有向脂肪、软骨、成骨、成肌等多向分化潜能。传统的成脂诱导分化采用的方法多为混合诱导剂法。成脂诱导剂的不足是带有毒性，对人体有较大危害。

除了以上通过诱导剂进行体外诱导分化外，用成熟体细胞与干细胞共培养同样可以使干细胞定性诱导分化。2000年，Maurin等采用间接共培养的方式，研究脂肪细胞对成骨细胞扩增和活性的影响，并证明成熟脂肪细胞对人的成骨细胞的扩增有抑制作用；但对成骨基质细胞的扩增及活性，无显着影响。2003年Shigehisa等采用三维胶原凝胶中共培养脂肪细胞和内皮细胞的方式研究二者间的相互作用，得出结论：内皮细胞参与到脂肪组织形成和扩增的过程当中。2007年，Wang等通过实验证明，鼠来源脂肪干细胞在胶原凝胶三维体系中，与OECs(Olfactory ensheathing cells-嗅鞘细胞)共培养过程中，能够分化成为OECs-like(嗅鞘样细胞)。

人脂肪干细胞在现有技术中有多种培养方式。比如：CN 102732477 B公开了一种人脂肪干细胞无血清基础培养基。本培养基使用血清替代剂，由高糖型DMEM基础培养基、人血清白蛋白、转铁蛋白、牛磺酸、还原型谷胱甘肽、铜蓝蛋白、L-抗坏血酸-2-硫酸酯、α-生育酚琥珀酸单酯、亚油酸、α-酮戊二酸和硒组成。无血清基础培养基因能免除常规含血清培养基中动物血清给人体健康带来的潜在威胁，其培养的脂肪干细胞更适于临床应用。

CN 104877962 A提供一种无血清的脂肪干细胞培养基，属于干细胞技术领域，包括IMDM基础培养基，还包括如下组分：重组人胰岛素、重组转铁蛋白、维生素C、人血清白蛋白、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子、纤维连接蛋白、胎球蛋白、茶多酚和干细胞生长因子。

CN 102757936 B公开了一种人脂肪干细胞增殖促进剂及其应用方法。所述的人脂肪干细胞增殖促进剂由胰岛素、氢化可的松、甲状旁腺激素、雌二醇、睾酮、血小板衍生生长因子-AB、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇、白血病抑制因子、L-抗坏血酸、生物素、地塞米松、IGF-I和SCF组成。

申请人发现以上的细胞培养基不仅成分复杂，有些组分成本高昂，而且细胞的培养一致性上还有改进的空间。

发明内容

本发明的目的是提供一种人脂肪干细胞特异性培养基，克服现有技术的培养基的缺点和风险。