[发明专利]超声波辅助法提取大孔树脂分离黄酮类化合物的方法

说明书

技术领域

本发明属于降糖药物技术领域，尤其涉及一种超声波辅助法提取大孔树脂分离黄酮类化合物的方法。

背景技术

目前，中国糖尿病患者数量已超过一亿，已成为仅次于印度位居世界第二的糖尿病国家。其中Ⅱ型糖尿病病发率非常严峻，对于糖尿病患者病发率急剧上升的趋势，研究具有降血糖功效的特效药物已迫在眉睫。神秘果含有奇特的神秘果素，是一种变味糖蛋白，能改变人的味觉，使原本酸度强烈的食物变成琼浆玉露般的甘甜，因而又被称为奇迹果、梦幻果。神秘果(Synsepalum dulcificum)系山榄科神秘果属，中国云南、海南、广东和福建等地区种植。神秘果叶含有较高的多糖、蛋白质、纤维和矿物质元素等成。其有降低糖尿病和高血压等作用，还可以使胃口变好、降低胃酸、促进消化等功效。其性寒、味苦可入药，有清热燥湿的作用，而且还可以止泻，对手机辐射也有一定的预防作用。神秘果叶可用于治疗糖尿病、高血压、尿酸和动脉硬化的天然药物，并且能够提高免疫力，增强肝胆功能。神秘果茎的功能成分具有抑制黑色素瘤和降低蘑菇络氨酸酶的功效。神秘果除了具有改变味觉功能外，还具有改善胰岛素抵抗及抗氧化能力。神秘果种子可以降低糖尿病小鼠空腹血糖值，促进胰岛素的正常分泌。神秘果含有奇特的神秘果素，是一种变味糖蛋白，能改变人的味觉，使原本酸度强烈的食物变成琼浆玉露般的甘甜，因而又被称为奇迹果、梦幻果。神秘果(Synsepalum dulcificum)系山榄科神秘果属，中国云南、海南、广东和福建等地区种植。植物多酚是一类具有独特生理功能和药物活性的植物次生代谢产物，大量研究表明，植物多酚在抗氧化、抗诱变，抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗病毒和预防中风等诸多方面具有显著功效，因而在医药、生化、食品及日用化工等领域具有广阔的开发前景。中国目前糖尿病患者数量已超过四千万，已成为仅次于印度位居世界第二的糖尿病国家。其中Ⅱ型糖尿病病发率非常严峻，对于糖尿病患者病发率急剧上升的趋势，研究具有降血糖功效的特效药物已迫在眉睫。

综上所述，现有技术存在的问题是：糖尿病患者病发率逐渐增多，急需更多的降血糖药物，而神秘果不仅营养丰富，且叶子具有很高的药用价值，但目前并没有较为深入的黄酮成分研究报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种超声波辅助法提取大孔树脂分离黄酮类化合物的方法。

本发明是这样实现的，一种超声波辅助法提取大孔树脂分离黄酮类化合物的方法，所述超声波辅助法提取神秘果叶黄酮类化合物方法包括：通过采集新鲜神秘果叶，晾干，粉碎过筛60目抽滤，离心分离，减压浓缩得到浓缩物；取一定浓度的神秘果叶黄酮类化合物的溶液，调节pH＝6.0，用恒流泵以40rpm恒流上样放入预处理好的HPD500型大孔树脂中；以水、10-20％乙醇溶液、50-60％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、无水乙醇进行梯度动态洗脱，每次洗脱直至流出液变为无色为止。

进一步，所述方法同时利用高效液相色谱分析各洗脱部位的主要化学成分为：水洗脱液的主要成分：表儿茶素衍生物和黄酮衍生物；50-60％乙醇洗脱液主要成分：表儿茶素、表儿茶素衍生物、对羟基肉桂酸、芦丁衍生物和黄酮衍生物；70-80％乙醇洗脱液主要成分：对羟基肉桂酸、芦丁衍生物和黄酮衍生物。

进一步，所述方法包括以下步骤：

步骤一，神秘果采集，晾干，粉碎过筛60目备用；

步骤二，利用超声波辅助法提取神秘果叶黄酮类化合物，抽滤，离心分离，减压浓缩，备用。

步骤三，将预处理好的HPD500型大孔树脂，湿法装入层析柱中。取200mL2.0mg/mL的神秘果叶黄酮类化合物的溶液(50-60％乙醇溶剂溶解)，调节pH＝6.0，用恒流泵以40rpm恒流上样，动态吸附后测定流出液的体积及浓度(即吸光度值)。再分别以水、10-20％乙醇溶液、50-60％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、无水乙醇进行梯度动态洗脱，每次洗脱直至流出液变为无色为止。分别收集洗脱液，减压浓缩，备用。

步骤四，利用高效液相色谱分析各洗脱部位的主要化学成分。

色谱条件：色谱柱：C18；柱温：30℃，流动相：水:甲醇2:8，进样量：50uL；流速：1mL/min；检测波长：208nm、254nm。

标准品的制备：精密称取5mg熊果酸、表儿茶素、芦丁、没食子酸、柚皮素、槲皮素、绿原酸、齐墩果酸、对羟基肉桂酸、儿茶素等标准样品及混合标样，水、60％、80％洗脱部位，用5mL无水甲醇(分析纯)完全溶解，进行成分分析。