[发明专利]一种快速检测猪腺病毒的试剂以及方法

说明书

本发明提供一用于检测样本中猪腺病毒的试剂，其中，该试剂包括如下引物对，所述的引物为上游引物：（5’—3’）ATCTTGAAATCACAATTCTTCTG；下游引物：（5’—3’）CAAGGAGCAGYTGGTGGAG，Y为简并引物，为T或C；以及利用该试剂检测猪腺病毒的方法；这样的试剂或者方法检测猪腺病毒特异性强，灵敏度高，可以快速检测猪的腺病毒。

技术领域

本发明涉及一种用于检测流体样品中的腺病毒的试剂,特别地，属于一种快速检测猪腺病毒的试剂以及方法。

背景技术

下面的背景技术用于帮助读者理解本发明，而不能被认为是现有技术。

腺病毒是双链DNA病毒，具有典型的二十面体病毒外壳，病毒外壳含有三种主要的蛋白：六邻体、五邻体和纤突，这些蛋白对于腺病毒的感染起重要作用。在腺病毒感染中，复制早期的基因主要有E1A、E1B、E2A、E2B、E3、E4，其中E1基因表达产物对蛋白的复制和转化起着重要作用，是病毒复制不可缺的产物。

猪腺病毒，属于腺病毒科哺乳动物腺病毒属，有4个血清型，猪腺病毒会引起猪腺病毒感染，存在一些脑炎、肾炎、肺炎和腹泻等临床症状，存在于普遍的猪群中，在猪的鼻腔、肛门、粪便中可以检测到，根据分离病毒和检测抗体的结果，发现世界各国的猪都在遭受该腺病毒的感染。

猪腺病毒只感染猪,不感染人和其他动物,但是该病毒可以转导多种人和动物的细胞。以猪腺病毒为基础的载体增殖滴度高,可以稳定地携带外源基因并实现外源基因在转导细胞中高效表达。同时，猪腺病毒与人腺病毒之间没有交叉免疫反应,因此,猪腺病毒载体既可以作为猪用疫苗的投递系统,又具有作为人用基因治疗和疫苗投递系统的潜力。目前，对于猪腺病毒的疫苗载体远远小于对于人腺病毒的研究，猪腺病毒载体疫苗将是疫苗载体开发的重要一个组成部分，同时，猪腺病毒的检测也是其市场化的一个短板。

基于复制缺陷型腺病毒载体制备的动物疫苗在以猪和牛为主的畜牧业中的运用正在逐步大规模实施。根据转基因技术的安全性严格的规范，对复制缺陷型腺病毒载体动物疫苗应用在猪和牛的安全性和对环境的影响需要快速检测。现在，猪腺病毒、牛腺病毒以及人复制缺陷型腺病毒已经成为畜牧业生产中最为关注的腺病毒类型，对其快速检测鉴定有着广泛的需求以及巨大的运用前景。上述三种腺病毒，易于混合感染，快速检测鉴定十分困难。

目前生物制品行业普遍采用细胞培养法，血吸附法，免疫荧光法进行检测，但这些方法敏感度低，检测周期长，检测精度低，结果判定易受多种因素影响，客观性不足，劳动量大等问题；常规PCR检测法虽然敏感性、稳定性、特异性较好，但容易污染，造成假阳性结果。这就需要提供一种更为可靠的、快速检测腺病毒，特别是猪腺病毒的试剂以及方法。

发明内容

我们的发明通过对NCBI数据库已报道的猪腺病毒基因序列比对，使用在线的BLAST找到高度保守区基因序列DBP(DNA Binding Protein)，该序列在各个血清型中高度同源，通过反复比对、筛选，设计了用于检测该序列的特异性的通用引物，不但适用于猪腺病毒5型，还适用于已知的其他3个血清型。

一方面，本发明提供一种用于检测样本中猪腺病毒的试剂，其中，该试剂包括1对引物，所述的引物为上游引物：(5’—3’)ATCTTGAAATCACAATTCTTCTG；下游引物：(5’—3’)CAAGGAGCAGYTGGTGGAG，Y为简并引物，为T或C。

在一些优选的方式中，所述的试剂包括能够完成核酸扩增的必要试剂。在一些优选的方式中，必要的试剂包括TaqDNA聚合酶。

在一些优选的方式中，所述的核酸扩增的方法为PCR、重组酶聚合酶扩增(RPA)、转录介导的扩增、基于核酸序列的扩增、信号介导的RNA扩增技术、链置换扩增、滚环扩增、环介导的DNA等温扩增、等温多重置换扩增、解链酶依赖性扩增、单引物等温扩增、环解链酶依赖性扩增以及切口和延长扩增反应中的一种或者几种。