[发明专利]生产新型靛蓝染料谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201711027820.X | 申请日： | 2017-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN109722401B | 公开（公告）日： | 2022-07-22 |
| 发明（设计）人： | 王猛;徐捷;刘扬;程海娇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/77;C12P17/16;C12R1/15 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 苏宇欢 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 新型 靛蓝 染料 谷氨酸 杆菌 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)，其特征在于，所述重组谷氨酸棒杆菌共表达靛蓝合成酶及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶，所述靛蓝合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示、核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示、核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；所述共表达是将靛蓝合成酶基因及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因置于同一载体同一启动子或者同一载体不同启动子或者分别克隆到两个载体上进行表达。
2.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述共表达是将靛蓝合成酶基因及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因置于同一载体同一启动子下表达，所述载体为pEC-XK99E，所述启动子为Ptrc。
3.权利要求1所述重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，包括如下步骤：将靛蓝合成酶基因及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因置于同一载体同一启动子或者同一载体不同启动子或者分别克隆到两个载体，再转化到谷氨酸棒杆菌。
4. 根据权利要求3所述的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，所述共表达靛蓝合成酶基因及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因置于同一载体同一启动子，所述共表达靛蓝合成酶基因及4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因之间添加如SEQ ID NO.1所示的SD序列，所述载体为pEC-XK99E，所述启动子为Ptrc。
5.权利要求1-2任一所述重组谷氨酸棒杆菌在发酵生产靛蓝染料中的应用。
6. 一种发酵生产靛蓝染料的方法，其特征在于，所述发酵生产靛蓝染料的方法为以L-谷氨酰胺为底物，利用权利要求1-2任一所述重组谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)，在18℃-30℃、180-220 rpm培养条件下，发酵48-72 h生产靛蓝染料。
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