[发明专利]荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法

权利要求书

1.一种荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法，其特征在于，具体为以下步骤：

（1）DNA三角形折纸结构的合成

将208条订书钉链Sequence No.1-208等量地溶解到MilliQ水中，使每条短链的最终浓度为200nM；将M13mp18 单链DNA100nM与混好的208条短链200nM以摩尔浓度比1：10的比例混合在1×TAE-Mg²⁺溶液中，所述1×TAE-Mg²⁺溶液为40mM三羟甲基氨基甲烷（Tris）、20mM醋酸、2 mM乙二胺四乙酸（EDTA）和12.5mM醋酸镁，pH 8.0；其中，M13mp18 单链DNA的最终浓度为5 nM，短链最终浓度为50nM；将混好的溶液放入PCR仪中，设定反应程序95℃持续3分钟，然后 缓慢降温至4℃，降温速率为0.2℃/10s；

（2）荧光光谱定量DNA三角折纸随离子浓度变化而产生的结构变化

将上述合成的DNA三角折纸结构置于超滤离心管中纯化，转速3000g，10分钟，离心3次，清除多余的订书钉链；

将纯化好的DNA三角折纸的终浓度定为2nM，取DNA三角折纸溶液，加入20×Eva Green，加入缓冲溶液，测量其荧光强度；

控制Mg²⁺浓度为原缓冲液中的1/10，静置5分钟至2小时，测量其荧光强度；

恢复溶液中Mg²⁺浓度，再次测量其荧光强度。

2.根据权利要求1所述荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法，其特征在于，始终保持DNA三角折纸的浓度为0.2nM， 根据荧光强度的大小确定DNA折纸结构的完整程度。

3.根据权利要求1所述荧光精确定量DNA折纸结构完整度的方法，其特征在于，利用离子浓度变化造成DNA三角折纸结构的变化，采用荧光强度精确定量该结构变化的百分比。